停循环相关脑损伤的大鼠海马线粒体COX蛋白获取及验证

为了明确不同脑温停循环对大鼠海马线粒体差异蛋白质的影响，探讨深低温停循环的脑保护机制，研究以16G导管和22G留置针分别穿刺颈内静脉和尾动脉，建立大鼠闭胸式体外循环模型.并在该模型下完成常温（35.5～37.5 ℃）和深低温（27 ℃）状态下停循环10 min，提取海马组织并纯化线粒体，电镜超微结构显示线粒体纯度和完整性均良好，可以进行下一步研究.按照蛋白质组学要求取线粒体蛋白质匀浆，SDS-PAGE预实验显示标本符合蛋白质组学的需要.最后进行i-TRAQ标记的蛋白质组学分析，获取7个差异蛋白质（依据表达量1.5倍或0.67倍，p0.05）.之后对其中的差异蛋白质细胞色素C氧化酶进行深入研究，免疫荧光染色精确定性表明线粒体和细胞质的COX蛋白在NTCA和DHCA组间的分布是有差异的，Western-blot半定量分析提示3组之间COX蛋白表达量无明显变化（p0.05），由此判断急性期深低温停循环的脑保护作用与其减少线粒体蛋白质COX向胞质的释放有关。