蛋白磷酸酶2C(PP2C)的表达、 纯化与催化活性 |
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引用本文: | 周 旺,亓晓艳,张应玖.蛋白磷酸酶2C(PP2C)的表达、 纯化与催化活性[J].吉林大学学报(理学版),2009,47(1):144-149. |
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作者姓名: | 周 旺 亓晓艳 张应玖 |
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作者单位: | 吉林大学 分子酶学工程教育部重点实验室, 长春 130021 |
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摘 要: | 从小鼠肌肉组织中提取了总RNA, 经RT PCR, 扩增出蛋白磷酸酶2C(PP2C)基因, 并构建了pUCm T载体. 经核酸序列分析证明PP2C基因序列正确后, 将pUCm T中的PP2C基因插入pET28a载体中, 构建了表达载体pET28a PP2C, 并转化到E.coli BL21(DE3)进行表达. 经测定, 该菌株表达目的蛋白PP2C的最适条件为: 诱导物IPTG的终浓度为0.8 mmol/L, 37 ℃, 诱导时间为20 h. 在此条件下, PP2C实现了高
效表达, 表达的PP2C蛋白约占菌体总蛋白的18.2%, 其中在裂解上清液、 沉淀中分别占总蛋白的7.1%和11.1%. 经SDS PAGE分析, 表达产物分子量约为42 000. 应用Ni NTA柱实现了可溶性PP2C的纯化, 收率达805%, 纯化的PP2C比活力达34.5 U/mg.
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关 键 词: | 蛋白磷酸酶2C(PP2C) 表达 纯化 活性 |
收稿时间: | 2008-05-23 |
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