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| 人源蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B功能域及其全酶的原核表达及活性比较 | |
| 引用本文： | 庞晓斌,谢欣梅,李晓婷,王守宝,杜冠华.人源蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B功能域及其全酶的原核表达及活性比较[J].河南大学学报(自然科学版),2014,44(2):196-201. |
| 作者姓名： | 庞晓斌 谢欣梅 李晓婷 王守宝 杜冠华 |
| 作者单位： | 1. 河南大学药物研究所,河南开封475004;中国医学科学院&北京协和医学院药物研究所国家药物筛选中心,北京100050 2. 河南大学药物研究所,河南开封,475004 3. 中国医学科学院&北京协和医学院药物研究所国家药物筛选中心,北京,100050 |
| 摘 要： | 通过设计引物,利用RT-PCR从人肝癌细胞(huh-7)中克隆蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)全长及功能域PTPc的cDNA序列并连接到pGEM-T Vector载体上,测序正确的cDNA序列连接到表达载体pET-32a(+)上,分别在大肠杆菌Transetta(DE3)和BL21(DE3)菌株中稳定表达目标蛋白,经Ni 2+亲和柱纯化后目的蛋白达到了电泳纯,通过酶促动力学方法分析两种蛋白的体外活性.本实验成功表达了PTP1B和PTPc可溶性蛋白,并发现Transetta(DE3)菌株较BL21(DE3)有更高的蛋白表达能力;酶促动力学分析表明,PTP1B全酶的Vmax为16.13mmol·L-1·s-1,Km为0.94mmol/L;其功能域PTPc的Vmax为5.49mmol·L-1·s-1,Km为0.54mmol/L.表明PTP1B全酶的活性高于PTPc功能域的活性. |
| 关 键 词： | PTP1B PTPc 蛋白表达 酶活性 |
Comparison of the Activity of Human Protein Tyrosine Phosphatase PTP1B Function Domain and Holoenzyme Gene Expression in Prokaryotic Expression |
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| PANG Xiaobin,XIE Xinmei,LI Xiaoting,WANG Shoubao,DU Guanhua.Comparison of the Activity of Human Protein Tyrosine Phosphatase PTP1B Function Domain and Holoenzyme Gene Expression in Prokaryotic Expression[J].Journal of Henan University(Natural Science),2014,44(2):196-201. | |
| Authors: | PANG Xiaobin XIE Xinmei LI Xiaoting WANG Shoubao DU Guanhua |
| Institution: | PANG Xiaobin;XIE Xinmei;LI Xiaoting;WANG Shoubao;DU Guanhua;Pharmaceutical Institute,Henan University;National Center for Pharmaceutical Screening,Institute of Material Medicine,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College; |
| Abstract: | |
| Keywords: | PTP1B PTPc protein expression enzyme activity |
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