| 法夫酵母整合型表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 陈丽娜,朱艳冰,倪辉,李利君.法夫酵母整合型表达载体的构建[J].集美大学学报(自然科学版),2014(3):185-191. |
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| 作者姓名： | 陈丽娜 朱艳冰 倪辉 李利君 |
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| 作者单位： | 集美大学生物工程学院;福建省高校食品微生物与酶工程技术研究中心;厦门市食品与生物工程技术研究中心; |
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| 基金项目： | 福建省自然科学基金资助项目(2012J01137);福建省教育厅科研基金项目(JA11152) |
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| 摘 要： | 为了建立法夫酵母虾青素代谢途径研究和分子育种的技术体系,构建了法夫酵母的整合型表达载体.通过测定法夫酵母对G418的抗性来确定抗性筛选物的质量浓度,以来源于法夫酵母本身的rRNA基因为基因同源重组片段,利用法夫酵母肌动蛋白启动子和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gpd)启动子,构建了携带G418抗性基因的整合型载体pMD-18spakta和pMD-18spgktg.结果表明:法夫酵母对20μg/mL质量浓度的G418敏感,将构建的载体转化法夫酵母菌株后,筛选得到了能够在含有G418的培养基上生长的转化子;利用PCR的方法检测到转化子中存在的抗性基因.将筛选得到的阳性菌株连续传代培养10次后,发现该菌株的G418抗性仍然存在;以总DNA为模板,用PCR的方法仍可检测到G418抗性基因.说明已经构建得到了遗传稳定性良好的法夫酵母整合型表达载体,构建的质粒pMD-18spakta和pMD-18spgktg可作为法夫酵母整合载体应用于法夫酵母的DNA重组实验.
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| 关 键 词： | 法夫酵母 整合载体 构建 G抗性 |
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