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高山离子芥磷脂酶Dα编码区基因序列克隆与表达载体构建
作者姓名:杨 宁  强治全  陈 霞  丁芳霞  王程亮
作者单位:西北师范大学生命科学学院;
基金项目:国家自然科学基金资助项目(31160087,31360061);甘肃省财政厅高校基本科研业务费项目;甘肃省教育厅科研基金(1101-06)
摘    要:磷脂酶D(PLD)是重要的细胞磷脂代谢酶,在植物的生长及对不良环境胁迫的抵御反应中起重要作用.本试验以高山离子芥(Chorispora Bungeana)为材料,取幼叶分离mRNA,反转录合成cDNA,PCR扩增加XbaΙ和SacΙ酶切位点的高山离子芥磷脂酶Dα(PLDα)编码区序列、测序.结果表明插入片段为PLDα目的基因片段,全长约1 600bp,blast比对发现该序列与Genbank中报道的拟南芥PLDα基因相比同源率为94.6%.回收纯化PCR产物,克隆至pTG19-T载体双酶切后将目的基因片段定向克隆至pBI-121载体,构建高山离子芥PLDα基因编码区片段的表达载体pBI121-PLDα,双酶切及PCR鉴定结果显示表达载体构建成功,为下一步进行抗逆转基因作物选育奠定了基础.

关 键 词:高山离子芥  PLDα基因  编码区序列  表达载体构建
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