| 组氨酸标签木聚糖酶的构建表达和酶特性鉴定 |
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| 引用本文： | 熊海容,陈 丰,王亚伟,张巍.组氨酸标签木聚糖酶的构建表达和酶特性鉴定[J].中南民族大学学报(自然科学版),2014(3):27-31. |
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| 作者姓名： | 熊海容 陈 丰 王亚伟 张巍 |
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| 作者单位： | 中南民族大学生命科学学院,武汉,430074 |
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| 基金项目： | 武汉市科技攻关项目，中央高校基本科研业务费专项基金资助项目 |
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| 摘 要： | 通过改变终止密码子位点,在一个耐热木聚糖酶突变株DSB的C末端添加了6聚组氨酸标签(His-tag),并完成了表达和酶特性鉴定.通过PCR将嗜热真菌DSM 10635来源的木聚糖酶突变体基因dsb的终止密码子序列定点突变为谷氨酸密码子序列,连接到表达载体pET-22b(+),转化Escherichia coli.BL21(DE3),诱导表达的耐热木聚糖酶DSB在C端含有6×His-tag.表达产物经硫酸铵分级沉淀和Ni Sepharose层析纯化,获得了电泳纯重组酶DSB.结果表明:添加组氨酸标签的酶与原始酶相比,酶学特性无变化.SDS-PAGE电泳结果显示该酶分子量约为23 kDa,重组酶最适pH为6.5,最适温度为75℃,在pH 510具有良好的稳定性,在pH 6.5,70℃条件下处理30min相对酶活力仍保留80%以上.
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| 关 键 词： | 耐热木聚糖酶 多聚组氨酸标签 定点突变 镍亲和层析 酶学特性 |
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