中间脉孢霉谷氨酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌和烟草中的表达

用谷氨酸脱氢酶（GDH）提高植物氮肥利用率是国际上生物工程研究的热点之一，通过RT－PCR方法克隆了真菌中间脉孢霉（Neurospora intermedia,简称Ni)，好食脉孢霉（N.sitophila)，粗糙脉孢霉（N.crassa)的gdh基因，进行序列测定，前两种gdh基因的序列为首次报道。分别将上述gdh基因克隆入pET30a质粒在大肠杆菌中表达，纯化后进行酶活性及米氏常数（Km)测定，结果发现大肠杆菌表达的Ni-GDH具有更高的酶活性，其Km值在0．3－0．45mmol/L左右。选择Ni-GDH基因转化烟草，发现它能促进烟草在低氮水平下的生长。