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| Reteplase基因的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达 | |
| 引用本文： | 江洁,江成英,杜连祥,路福平,郭洪杰,李迪,刘海洋.Reteplase基因的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达[J].华南理工大学学报(自然科学版),2006,34(12):25-29,50. |
| 作者姓名： | 江洁 江成英 杜连祥 路福平 郭洪杰 李迪 刘海洋 |
| 作者单位： | 1. 大连民族学院,生命科学学院,辽宁,大连,116600 2. 齐齐哈尔大学,生命科学与工程学院,黑龙江,齐齐哈尔,161006 3. 天津科技大学,生物工程学院,天津,300222 |
| 摘 要： | 进行了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体Reteplase(r-PA)基因的克隆,并在甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)中实现了胞外表达。以基因工程菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)306染色体DNA为模板,通过PCR技术克隆了r-PA基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体上并进行了序列测定。测序结果表明:克隆到的基因序列长1.1 kb,与已发表的Reteplase基因同源性达99.91%,其编码的氨基酸顺序一致。文中还构建了甲醇毕赤酵母分泌性表达载体pMETαA-r-PA,用PacⅠ单酶切将pMETαA-r-PA线性化后,采用电转化的方法将其导入甲醇毕赤酵母PMAD16中,PCR和表型鉴定表明,筛选到Reteplase基因已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上的阳性克隆。经摇瓶初步培养及以甲醇为唯一碳源诱导表达,胞外Reteplase表达水平最高达27.93mol/(s.L)。 |
| 关 键 词： | 组织型纤溶酶原激活剂 甲醇毕赤酵母 表达 |
| 文章编号： | 1000-565X（2006）12-0025-05 |
| 收稿时间： | 2005-09-30 |
| 修稿时间： | 2005-09-30 |
Cloning of Reteplase Gene and Expression of the Gene in Pichia methanolica |
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| Jiang Jie,Jiang Cheng-ying,Du Lian-xiang,Lu Fu-ping,Guo Hong-jie,Li Di,Liu Hai-yang.Cloning of Reteplase Gene and Expression of the Gene in Pichia methanolica[J].Journal of South China University of Technology(Natural Science Edition),2006,34(12):25-29,50. | |
| Authors: | Jiang Jie Jiang Cheng-ying Du Lian-xiang Lu Fu-ping Guo Hong-jie Li Di Liu Hai-yang |
| Abstract: | |
| Keywords: | Reteplase(r-PA) |
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