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假单胞菌褐藻胶裂合酶活性片段的基因克隆及重组表达条件的优化
引用本文:王怀玉,古静燕,李天东,韩文君,罗英,阮期平.假单胞菌褐藻胶裂合酶活性片段的基因克隆及重组表达条件的优化[J].四川师范大学学报(自然科学版),2008,31(2):242-246.
作者姓名:王怀玉  古静燕  李天东  韩文君  罗英  阮期平
作者单位:绵阳师范学院,分子生物学与生物制药重点实验室,四川,绵阳,621000
基金项目:四川省教育厅自然科学基金
摘    要:为分析假单胞菌(Pseudomonas)膜周质中褐藻胶裂合酶(alginate lyase,AlgL)的最小活性单元,进行了活性片段的初步研究.用简并引物克隆MY01菌株中AlgL基因的片段,用特异引物扩增目的序列并克隆入pBAD gⅢ/A载体,转化大肠杆菌并筛选阳性克隆.进行L-阿拉伯糖诱导表达条件的优化,超声破碎重组菌体并分离水溶性组分作为粗酶,以褐藻酸钠为底物进行酶解反应,在235 nm测定产物的吸收值.结果该基因片段300 bp大小,GenBank收录号为AY736133,所编码的氨基酸序列中含有基序“NNHSYW”,且在系统发育树中与假单胞菌的AlgL聚类.在优化条件下获得粗酶,酶解反应产物在235 nm有显著吸收,表明重组融合蛋白具有褐藻胶裂合酶活性.褐藻胶裂合酶的研究较多,但其活性片段的重组表达研究少见报导.

关 键 词:假单胞菌  褐藻胶裂合酶  基序  基因克隆  表达
文章编号:1001-8395(2008)02-0242-05
修稿时间:2007年6月6日

Cloning of Partial Alginate Lyase Gene From Pseudomonas and Optimization of Recombination Expression Conditions
WANG Huai-yu,GU Jing-yan,LI Tian-dong,HAN Wen-jun,LUO Ying,RUAN Qi-ping.Cloning of Partial Alginate Lyase Gene From Pseudomonas and Optimization of Recombination Expression Conditions[J].Journal of Sichuan Normal University(Natural Science),2008,31(2):242-246.
Authors:WANG Huai-yu  GU Jing-yan  LI Tian-dong  HAN Wen-jun  LUO Ying  RUAN Qi-ping
Abstract:
Keywords:
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