| 摘 要： | 为获得眼镜王蛇（Ophiophagus hannah,简称Oh）蛇毒α－神经毒素（α-NT）的基因序列,依据眼镜蛇科不同毒蛇种类来源的α－NT基因有较高的同源性,设计1对上下游引物,为克服引物带来模糊扩增,在蛋白编码部分再设计1对上下游特异引物,用Nacleospin RNA Kit法从3条活眼镜王蛇毒腺中提取mRNA,以3′端引物合成的cDNA作为模板进行PCR扩增反应,测定产物的核苷酸序列,得到全长474bp的眼镜王蛇cDNA基因核苷酸序列。该核苷酸序列的信号肽与眼镜蛇树属Pseudonnaja textilis(Pt)、海蛇Laticauda semifasciata(Ls)100%同源,与眼镜蛇南洋亚种Naja sputatrix (Ns)、银环蛇（Bungarus multicinctus)(Bm)96.8%同源;蛋白密码部分有83．3％与Ns、79．2％与Pt、76．4％与Ls、74．1％与Bm同源。信号肽后紧接着的72个氨基酸有90．3％与已发现的眼镜王蛇毒长链α-NT Toxin a同源,大约有73．6％与Toxin b、69．7％与Oh-4、66．7％与Oh-5、56．9％与Oh-6A和6B同源,并与α－银环蛇毒素54．2％同源。说明新发现的眼镜王蛇cDNA是一条长链α-NT基因。
|
