| Pfu DNA聚合酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)中的表达及快速纯化 |
| |
| 引用本文： | 何华华,胡晓韵,王婷,喻婵.Pfu DNA聚合酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)中的表达及快速纯化[J].湖北大学学报(自然科学版),2019,41(3). |
| |
| 作者姓名： | 何华华 胡晓韵 王婷 喻婵 |
| |
| 作者单位： | 湖北大学生命科学学院,生物资源绿色转化协同创新中心,湖北武汉430062;湖北大学生命科学学院,生物资源绿色转化协同创新中心,湖北武汉430062;湖北大学生命科学学院,生物资源绿色转化协同创新中心,湖北武汉430062;湖北大学生命科学学院,生物资源绿色转化协同创新中心,湖北武汉430062 |
| |
| 基金项目： | 油料脂质化学与营养湖北省重点实验室开放基金 |
| |
| 摘 要： | 来源于Pyrococcus furiosus COM1菌的Pfu DNA聚合酶具有保真性高、延伸速度快、热稳定性强等特点,能够提高PCR反应过程中的扩增效率,减少错误碱基掺入率.以大肠杆菌Rosetta(DE3)为重组细胞,利用一种快速表达纯化方法,让Pfu DNA聚合酶的表达纯化过程变得更加简便,并维持其高活性.结果表明,Pfu DNA聚合酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)中能够进行大量表达,同时60℃高温水浴能有效去除杂蛋白,简化纯化步骤及提高Pfu DNA聚合酶纯度.经过一系列纯化步骤处理后,Pfu DNA聚合酶仍然能够保持较好的酶活,且在100μL PCR反应体系中,加入4μL的1 mg/mL Pfu DNA聚合酶液效果最佳.
|
| 关 键 词： | Pfu DNA聚合酶 Rosetta(DE3) 亲和层析 PCR检测 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
