| SUMO融合表达对淀粉酶N-Amy活性的影响 |
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| 引用本文： | 王美星,向腊,胡慧贞,巫攀,张桂敏.SUMO融合表达对淀粉酶N-Amy活性的影响[J].湖北大学学报(自然科学版),2019,41(3). |
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| 作者姓名： | 王美星 向腊 胡慧贞 巫攀 张桂敏 |
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| 作者单位： | 湖北大学生命科学学院,湖北武汉,430062;湖北大学生命科学学院,湖北武汉,430062;湖北大学生命科学学院,湖北武汉,430062;湖北大学生命科学学院,湖北武汉,430062;湖北大学生命科学学院,湖北武汉,430062 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;湖北省自然科学基金杰出青年人才项目 |
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| 摘 要： | 前期解析了一个来自嗜碱菌Bacillus pseudofirmus 703的新型的碱性淀粉酶Amy703,该酶含有一个未知功能的N端结构域,将该结构域缺失后得到的突变体N-Amy相对野生型Amy703比酶活提高了35倍;底物结合实验显示Amy703可以结合不可溶性底物,单独的N端结构域和N端结构域缺失突变体N-Amy都不能结合,推测N端结构域会造成催化结构域的结构变化从而引起比酶活的大幅提高.为了进一步探究Amy703特异的N端结构域造成酶活显著下降的原因,将Amy703的N端结构域替换为SUMO蛋白,实验结果显示裂解液上清的SUMO/N-Amy条带比Amy703粗亮,验证了SUMO蛋白的促可溶性作用;但纯化后的融合蛋白SUMO/N-Amy的比酶活显著低于N-Amy,仅和野生型Amy703的比酶活相当,表明SUMO与N-Amy的融合显著降低了酶活,同时也预示着N端多一段结构域会影响到催化结构域的结构变化.此外,对SUMO/N-Amy融合蛋白是否与底物结合进行了探讨,为进一步解析Amy703的N端结构域功能提供了实验依据.
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| 关 键 词： | 碱性淀粉酶 N端结构域 SUMO蛋白 底物结合能力 比酶活 |
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