| 斑马鱼PKR的dsRBM1和dsRBM3重组及体外功能分析 |
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| 作者姓名： | 柳铭山 周细根 欧湘滢 高宗泽 李婷婷 冯敏 何康 胡有生 |
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| 作者单位： | 井冈山大学医学部基础医学与药学院,江西,吉安 343009;井冈山大学医学部基础医学与药学院,江西,吉安 343009;井冈山大学医学部基础医学与药学院,江西,吉安 343009;井冈山大学医学部基础医学与药学院,江西,吉安 343009;井冈山大学医学部基础医学与药学院,江西,吉安 343009;井冈山大学医学部基础医学与药学院,江西,吉安 343009;井冈山大学医学部基础医学与药学院,江西,吉安 343009;井冈山大学医学部基础医学与药学院,江西,吉安 343009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31560595）;江西省教育厅科技计划项目（GJJ170630）;井冈山大学第六批大学生创新创业训练计划项目（65） |
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| 摘 要： | 为了重组斑马鱼(Daniorerio)双链RNA依赖的蛋白激酶(DrPKR)的双链RNA结合模体1(dsRBM1)和双链RNA结合模体3(dsRBM3)基因,并对重组基因表达的蛋白进行鉴定和功能分析,设计定向删除引物,应用PCR技术扩增DrPKR的ds RBM1和dsRBM3的基因片段,通过重叠PCR技术将dsRBM1和dsRBM3基因重组在一起得到dsRBM13基因,再将dsRBM13构建到原核表达质粒pET32a上并表达和纯化蛋白;通过表达蛋白的二聚化实验和pull down实验对重组蛋白dsRBM13进行体外功能分析。结果:DrPKR的ds RBM1和dsRBM3重组的蛋白dsRBM13可以进行二聚化和多聚化,且能结合Poly I:C(人工合成的dsRNA)。因此,重组DrPKR蛋白模体dsRBM13仍然具有二聚化和dsRNA结合活性,提示串联了三个dsRBM的Dr PKR激活过程中,串联两个dsRBM对DrPKR激活是必需的,并且在DrPKR结合dsRNA的激活过程中,因dsRNA的长短和空间结构的多样性,含有三个dsRBM的DrPKR可能存在更强和更多的结合方式,因此具有更强的抗病毒免疫反应功能。
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| 关 键 词： | DrPKR dsRBM13 二聚化 Poly I:C pull-down 重组 |
| 收稿时间： | 2019-03-16 |
| 修稿时间： | 2019-05-18 |
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