| 表达肿瘤抗原HPV-58 E7的HLA-A*0201阳性宫颈癌细胞模型的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 林洁,李旋,吕琦,童亮,张士煜,邓双胜.表达肿瘤抗原HPV-58 E7的HLA-A*0201阳性宫颈癌细胞模型的构建和鉴定[J].云南大学学报(自然科学版),2015,37(3):437-444. |
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| 作者姓名： | 林洁 李旋 吕琦 童亮 张士煜 邓双胜 |
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| 作者单位： | 1.云南大学 生命科学学院,云南 昆明 650091 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31260226);云南省应用基础研究计划(2012FB121);云南省教育厅科学研究基金(2011Z051) |
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| 摘 要： | 为建立内源性表达58型人乳头瘤病毒(Huamn papillomavirus type 58,HPV-58)重要癌抗原E7蛋白的HLA-A*0201阳性人宫颈癌细胞模型.以HPV-58全基因组为模板,采用PCR法扩增E7蛋白的编码基因,构建真核表达载体pEGFP-N2-HPV58E7;转化大肠杆菌DH5α,通过DNA测序鉴定质粒载体;经除内毒素纯化后,将大量制备的重组质粒瞬时转染293T细胞,采用RT-PCR和细胞免疫荧光方法研究重组质粒在人源细胞中的表达情况;最后,选择HPV检出阴性的HLA-A*0201阳性人宫颈癌C33A细胞株为宿主细胞,采用脂质体转染、G418抗性加压筛选和细胞克隆化培养技术,建立能够稳定表达HPV-58 E7的恒定转染细胞株.采用RT-PCR、Western-blot和细胞增殖测定等方法从转录、翻译和表型等3个层次对所建细胞株进行鉴定研究.研究结果显示:克隆制备了HPV-58 E7蛋白的编码基因;构建获得了能够在人源细胞中表达HPV58E7-EGFP融合蛋白的真核表达质粒;并成功建立了能够稳定表达HPV-58 E7的HLA-A*0201阳性人宫颈癌细胞模型;核酸和蛋白水平的鉴定结果表明所建模型细胞能够表达HPV-58 E7癌抗原,宿主细胞本身表达的Ⅰ类组织相容性抗原HLA-A*0201有望通过内源性抗原加工途径将E7抗原的细胞毒性T细胞(Cytotoxic lyphocyte,CTL)表位提呈到细胞表面;另外,细胞增殖试验结果亦表明该细胞模型体现出E7蛋白显著的诱导细胞增殖的生物学特征.总之,能够稳定表达HPV-58 E7癌蛋白的HLA-A*0201阳性人宫颈癌细胞模型的建立为后续即将展开的以HPV-58 E7为靶标的宫颈癌治疗性疫苗和药物的寻找和研究奠定基础.
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| 关 键 词： | HPV-58 癌抗原E7 HLA-A*0201阳性 人宫颈癌细胞模型 |
| 收稿时间： | 2014-10-20 |
Establishment and characterization of a HLA-A*0201 human cervical cancer cell model expressed tumor antigen HPV-58 E7 |
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| LIN Jie;LI Xuan;LYU Qi;TONG Liang;ZHANG Shi-yu;DENG Shuang-sheng.Establishment and characterization of a HLA-A*0201 human cervical cancer cell model expressed tumor antigen HPV-58 E7[J].Journal of Yunnan University(Natural Sciences),2015,37(3):437-444. |
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| Authors: | LIN Jie;LI Xuan;LYU Qi;TONG Liang;ZHANG Shi-yu;DENG Shuang-sheng |
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| Institution: | 1.School of Life Science,Yunnan University,Kunming 650091,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | HPV-58 oncoprotein E7 HLA-A*0201 positive human cervical cancer cell mode |
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