| 卵形鲳鲹主要致病链球菌多重PCR诊断技术的建立 |
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| 引用本文： | 熊向英,蔡小辉,彭银辉,黄国强,梁志辉,王志成.卵形鲳鲹主要致病链球菌多重PCR诊断技术的建立[J].广西科学,2016,23(1):35-40. |
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| 作者姓名： | 熊向英 蔡小辉 彭银辉 黄国强 梁志辉 王志成 |
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| 作者单位： | 广西海洋研究所,广西海洋生物技术重点实验室,广西北海536000 |
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| 基金项目： | 广西面上基金项目(2012GXNSFAA053065)，广西科技攻关项目(桂科攻1222013-2)，广西区直属公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(GXIF-2012-02)，国家海洋局项目(201205028-4) |
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| 摘 要： | 【目的】快速、准确地检测卵形鲳鲹(Trachinoms ovatus)感染无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)、海豚链球菌(Streptococcus iniae)和格式乳球菌(Lactococcus garvieae)4种主要的致病菌,为卵形鲳鲹的健康养殖提供依据。【方法】针对4种致病菌的特异基因设计特异性引物cfb-F/cfb-R,tuf-F/tuf-R,Si-F/Si-R,PLG-F/PLG-R,建立多重PCR反应体系,通过调试各引物对之间的最佳比例以及最适退火温度,对反应体系进行优化及灵敏度测试。2014年6~8月,应用该体系对北海及湛江各养殖场的发病卵形鲳鲹进行检测,然后用通用引物扩增16SrRNA基因,经测序、比对检测体系的准确性。【结果】反应体系中cfb-F/cfb-R,tuf-F/tuf-R,Si-F/Si-R,PLG-F/PLG-R的最适浓度分别为0.2μmol/L,0.08μmol/L,1.6μmol/L和0.4μmol/L;最优退火温度为54.3℃;4种目标菌的检测灵敏度为5×10~(-2) ng/μL;11份病原样品检测中,2份出现海豚链球菌的目的条带,4份出现无乳链球菌的目的条带,5份未见目的条带,和测序分析结果一致。【结论】多重PCR方法能代替传统的微生物检测方法特异、快速、灵敏地检测4种致病菌。
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| 关 键 词： | 多重PCR 链球菌病 无乳链球菌停乳链球菌 格式乳球菌 海豚链球菌 |
| 收稿时间： | 2015/6/15 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2015/8/5 0:00:00 |
Development of Multiplex PCR Assay for Detection of Main Streptococcosis Pathogens in Trachinoms ovatus |
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| XIONG Xiangying,CAI Xiaohui,PENG Yinhui,HUANG Guoqiang,LIANG Zhihui and WANG Zhicheng.Development of Multiplex PCR Assay for Detection of Main Streptococcosis Pathogens in Trachinoms ovatus[J].Guangxi Sciences,2016,23(1):35-40. |
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| Authors: | XIONG Xiangying CAI Xiaohui PENG Yinhui HUANG Guoqiang LIANG Zhihui and WANG Zhicheng |
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| Institution: | Guangxi Key Laboratory of Marine Biotechnology, Guangxi Institute of Oceanology, Beihai, Guangxi, 536000, China,Guangxi Key Laboratory of Marine Biotechnology, Guangxi Institute of Oceanology, Beihai, Guangxi, 536000, China,Guangxi Key Laboratory of Marine Biotechnology, Guangxi Institute of Oceanology, Beihai, Guangxi, 536000, China,Guangxi Key Laboratory of Marine Biotechnology, Guangxi Institute of Oceanology, Beihai, Guangxi, 536000, China,Guangxi Key Laboratory of Marine Biotechnology, Guangxi Institute of Oceanology, Beihai, Guangxi, 536000, China and Guangxi Key Laboratory of Marine Biotechnology, Guangxi Institute of Oceanology, Beihai, Guangxi, 536000, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | multiplex PCR Streptococcosis Streptococcus agalactiae Streptococcus dysgalactiae Streptococcus iniae Lactococcus garvieae |
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