| 嗜热内切-β-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的分泌表达 |
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| 作者姓名： | 郑春阳 柳晓瑜 王巍 |
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| 作者单位： | 天津强微特生物科技有限公司 |
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| 基金项目： | 天津市滨海新区科技小巨人成长计划-科技型企业创新发展(科技创业)项目(2010-BK130070);科技型中小企业技术创新基金项目(11C26211203970);天津市滨海新区重大科技项目(2011-BK120014);天津市科技计划项目(12ZCZDSY01800) |
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| 摘 要： | 首先通过引物设计扩增嗜热内切-β-1,4-葡聚糖酶基因,然后采用Not I和Xho I双酶切目的基因与载体pPICZα-A,通过T4连接酶连接后转化DH5α菌株,挑取阳性克隆进行测序,测序正确阳性克隆放大培养,大量提取质粒,并采用限制性内切酶Sac I线性化质粒,电转化感受态酵母细胞,经培养后挑选转化子分别对应点种到MM、MD平板,并利用ZeocinTM获得多拷贝重组子,最后经甲醇诱导,并于48、54 h取样,经SDS-PAGE分析,结果表明整合嗜热内切-β-1,4-葡聚糖酶的毕赤酶母工程菌株构建成功.
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| 关 键 词： | 毕赤酵母 内切-β-1,4-葡聚糖酶 分泌表达 双酶切 甲醇诱导 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
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