| 人胰蛋白酶原-2在大肠杆菌中的表达、纯化与活性测定 |
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| 引用本文： | 涂艳,欧西军,朱乃硕.人胰蛋白酶原-2在大肠杆菌中的表达、纯化与活性测定[J].复旦学报(自然科学版),2004,43(6):1067-1072,1078. |
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| 作者姓名： | 涂艳 欧西军 朱乃硕 |
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| 作者单位： | 复旦大学,生命科学学院,微生物学和微生物工程系,复旦金鹰生物医药研发中心,上海,200433;复旦大学,生命科学学院,微生物学和微生物工程系,复旦金鹰生物医药研发中心,上海,200433;复旦大学,生命科学学院,微生物学和微生物工程系,复旦金鹰生物医药研发中心,上海,200433 |
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| 摘 要： | 胰蛋白酶原-2是急性胰腺炎相关的敏感而特异的标志物，并且与多种肿瘤转移的过程密切相关．对胰蛋白酶原-2基因5’端4个氨基酸的密码子碱基进行简并突变，并在其3’端连接6个组氨酸编码序列构建含重组质粒pBVTg2的大肠杆菌工程菌-pBvTg2／DH5α．重组大肠杆菌经温度诱导后获得了高效表达，重组蛋白占总菌体蛋白的20％，并以包涵体形式存在．包涵体经尿素缓冲液裂解后，通过Ni-NTA亲和树脂一步分离纯化．纯化蛋白经SDS-PAGE分析及利用anti—histidine mAb进行Western blotting分析，以及蛋白N末端测序分析，结果表明与目的蛋白特征相符合．纯化的重组人胰蛋白酶原-2经复性后能与天然人胰蛋白酶原-2的单抗antihTrypsinogen2 mAb特异结合，复性后的蛋白在肠激酶作用后测得具有74BAEEU／mg的胰蛋白酶比活力，为进行胰蛋白酶原-2单克隆抗体的制备及其检测和应用奠定了基础．
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| 关 键 词： | 胰蛋白酶原-2 急性胰腺炎 原核表达 |
| 文章编号： | 0427-7104(2004)06-1067-06 |
Expression and Purification of Human Trypsinogen-2 in E.coli and Its Activity Assay |
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| TU Yan,OU Xi-jun,ZHU Nai-shuo.Expression and Purification of Human Trypsinogen-2 in E.coli and Its Activity Assay[J].Journal of Fudan University(Natural Science),2004,43(6):1067-1072,1078. |
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| Authors: | TU Yan OU Xi-jun ZHU Nai-shuo |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | trypsinogen-2 acute pancreatitis prokaryotic expression |
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