一株产吩嗪羧酸抗生素的甜菜内生细菌的分离与鉴定

从中国农业大学试验田中生长的健康甜菜肉质根内分离到1株分泌高活性抗真菌色素物质的优势内生细菌TCl,通过形态学、生理生化特征和16SrDNA系统发育分析,确认该菌株为绿针假单胞菌致金色假单胞菌亚种（Pseudomonas chlororaphis subsp．aureofaciens）。对TCI发酵分泌物经硅胶柱层析分离提纯后,采用薄层层析（TLC）和紫外一可见光谱扫描分析确认其主要活性成分为吩嗪一1一羧酸（Phenazine一1一Carboxylic Acid,PCA）。从TCl菌悬液浸种处理过的甜菜苗根内可以重复分离到完全相同的菌株,表明TCl的确可以在甜菜根内定殖,该菌株有可能被制成活菌制剂作为生物农药直接应用于宿主植物病害的生物防治。     

F3重组毒素的克隆表达及纯化

以pEKH-F3质粒为模板,PCR扩增F3片段,将F3插入克隆质粒PQE80L,转化大肠杆菌,筛选,获得含有F3的PQE80L重组载体的克隆.提取绿脓杆菌菌株染色体DNA为模板,PCR扩增绿脓杆菌外毒素A催化区,PE40.然后将PQE80-F3和PE40重组,得到表达PQE80L-F3-PE40载体.转化至大肠杆菌DH5a,BL21,表达融合蛋白F3-PE40.结果显示,大肠杆菌表达了融合蛋白F3-PE40,表达的融合蛋白量大概占菌体总体蛋白量的20%.通过质粒提取、PCR扩增构建F3-PE40表达载体转化大肠杆菌,成功地表达了融合蛋白F3-PE40,为大规模表达、纯化F3-PE40的进一步功能奠定了基础.     

培养基成分对海洋假单胞菌7-11产蛋白酶的影响

对海洋假单胞菌7-11(pseudomonas sp.7-11)产蛋白酶进行了培养基的优化,初步确定了促使蛋白酶产率提高的培养基的配方.经过26℃、140r/min、12 h培养,蛋白酶的相对产量可达201.7 IU/mL,比培养基优化前的26.8 IU/mL提高了646%.     

门多萨假单胞菌DS04-T对Poly(3HB-co-4HB)的降解研究

考察了门多萨假单胞菌DS04-T对Poly(3HB-co-4HB)的降解行为。以Poly(3HB-co-4HB)为唯一碳源,分别考察培养时间、培养温度、摇床转速、装液量、培养基起始pH值、接种量等因素对降解行为的影响。结合正交试验优化获得了菌株的最佳产酶条件:培养时间为28h,培养温度为30℃,培养基初始pH值为7.3,摇床转速为150r/min,培养基装液量为120mL(250mL三角瓶),接种量为1.5%(体积分数),此条件下菌株对Poly(3HB-co-4HB)的降解酶活力可达(26.2±0.7)U.mL-1。     

耐碱性木聚糖酶发酵生产条件的研究

研究了不同培养条件下的产耐碱性木聚糖酶的情况 .类黄假单胞菌SQ153 产酶适宜条件为 :以4%的麸皮为碳源 ,以 0 .6 %的尿素为氮源 ,pH 10 .0 ,37℃ ,2 0 0r/ pm培养 14h ,其酶活力达 5 98IU/mL培养基 .在 5L自控发酵罐中 ,产酶达到同样水平 ,发酵周期缩短约 1h .     

降解胆固醇的假单胞菌DGC-2的发酵培养基和培养条件

从动物粪便样品中分离出一株胆固醇氧化酶活力较高的DGC-2菌株,经鉴定为假单胞菌.利用单因子实验和正交试验对DGC-2菌株产胆固醇氧化酶摇瓶发酵的培养基及培养条件进行优化.其产酶的最适培养基为:蔗糖5 g/L,酵母粉3 g/L,牛肉膏1 g/L,吐温-80 1 g/L,胆固醇1 g/L,NH4NO31 g/L,KH2PO40.25 g/L,MgSO4.7H2O 0.25 g/L,FeSO40.001 g/L;最适培养条件为:初始pH6.5,接种量8.0%(v/v),32℃培养50h.在最适培养基及最适培养条件下,胆固醇氧化酶的活力可达到712 U/L.     

铜绿假单胞杆菌调节基因突变株的分离及特性

铜绿假单胞杆菌ＰＡＯ１经过亚硝基胍诱变获得了弹性蛋白酶缺失的突变株。经弹性蛋白营养琼脂平板法，从１０次独立处理的６００００个菌落中得到７１株该酶缺失的突变株，其突变株对Ｎ－３－氧代己酰－Ｌ－高丝氨酸内酯（ＨＳＬ）诱导物有无反应分成２组。ＰＡＮＯ６７菌株在加入诱导物后能恢复该酶产生，经过菌落形态、生化特征和细胞膜蛋白质成份的分析，除该酶产生缺失外，突变株ＰＡＮＯ６７与亲本菌株ＰＡＯ１相同，结果表明，ＰＡＮＯ６７是弹性蛋白酶操纵子的调节基因发生突变的诱变菌株。     

应用正交实验研究铜绿假单胞菌原生质体制备与再生

通过对铜绿假单胞菌原生质体制备与再生进行正交实验,探讨各因子对铜绿假单胞菌原生质体制备与再生影响水平,得到铜绿假单胞菌原生质体制备与再生的最优条件:酶解时间 0. 5h,酶浓度 2mg/L,菌龄为 15h 此时原生质体形成率为 80. 5%,再生率为 20. 6%