Ca^2＋和Mg^2＋对54kD钙结合蛋白荧光强度影响的研究

猪血小板 5 4kD钙结合蛋白 (calciumbindingprotein ,CaBP)是一个等电点为 5 .5的弱酸性蛋白质 ,其N 末端为丙氨酸 (Ala) ,且未经修饰 ,在 2 80nm波长的紫外光激发下 ,该蛋白质具有λmax为 335nm的内源荧光发射光谱 ,Ca2 +、Mg2 +均能减弱其发射荧光的强度 ,但对其λmax没有影响 .通过测定不同Ca2 +浓度下荧光强度的变化 ,可计算出在无Mg2 +存在时 ,该蛋白质的钙结合常数为 3.2× 10 - 8mol/L ,而在Mg2 +饱和条件下 ,钙结合常数为 7.4× 10 - 6 mol/L .乙醇亦不影响该蛋白质荧光的λmax,而对其荧光强度的影响则依赖于是否与钙结合 .未与Ca2 +结合时 ,乙醇浓度的增加导致荧光强度增强 ,与Ca2 +结合后 ,在低浓度乙醇溶液中 ,蛋白荧光强度减小 ,至乙醇浓度大于 16 .6 %后 ,其荧光强度逐渐增强 ,在 35 %乙醇溶液中 5 4kDCaBP对Ca2 +不敏感     

菠菜中高活性高等电点的乙醇酸氧化酶同工酶纯化方法的改进

通过缩短DEAE-celluloses柱长度,提高其洗脱液pH,可快速地从菠菜绿叶中纯化得到乙醇酸氧化酶同工酶,证实其具高活性113.0 U/mg·min和高等电点(pI)10.6.纯化后产率为0.14％,纯化倍数为66.5.经SDS-PAGE和毛细管电泳(CE-SDS)均只有40kD单带,说明已纯化至电泳纯.     

菠菜中不同等电点的乙醇酸氧化酶的提取和特性

从不同批次的菠菜绿叶中可纯化出5种不同活性和等电点（pI）的乙醇酸氧化酶（CO）．SDSPAGE表明它们均有40kD亚基,它们的比活会随蛋白浓度的增加而上升．第一种CO的pI〈8．3,比活为0．47U／mg,PAGE测定其全酶相对分子量（Mr）为280kD,280kD较稳定．第二种CO的pI〈8．3,但比活为3．44U／mg,PACE测定其Mr为560kD,但很快解聚为280kD．解释了前人报告CO的Mr大多为280kD．第三种CO的pI≈8．3,比活为8．4U／mg,放置后pI会下降至〈8．3,此时用PAGE测出其Mr为560kD．第四种CO的pI〉8．3,比活为27．8U／mg,放置pI也会下降为8．3．第五种CO的pI〉10．2,活性高达113U／mg,放置后其pI也会下降至〈8．3,由于CO的pI会下降,暗示低pI的CO可能并不存在于植物体内,而是实验中的娇作物．