MTMR14基因缺失促进小鼠成肌细胞增殖和分化

为研究磷酸肌醇磷酸酶肌管相关蛋白14(MTMR14)在骨骼肌发生中的作用,通过组织切片和细胞培养技术研究了MTMR14敲除对骨骼肌的组织结构、成肌细胞分化和增殖的影响.结果表明:MTMR14敲除小鼠的腓肠肌和比目鱼肌的结构较同窝野生型小鼠产生了明显变化,MTMR14敲除小鼠的成肌细胞的分化和增殖成肌小管过程较野生型显著加快.MTMR14基因敲除后小鼠肌管细胞中平均细胞核数显著增加.故MTMR14基因缺失/敲除导致骨骼肌组织结构异常,干扰了骨骼肌肌肉发生过程中的成肌细胞的增殖和分化.     

槐属二氢黄酮G促进L6细胞内GLUT4的表达和转运

利用细胞葡萄糖摄取检测试剂盒检测苦参中槐属二氢黄酮G(Sophoraflavanone G,SFG) 对L6细胞葡萄糖摄取的影响,发现SFG能够增加大鼠成肌细胞 (L6) 的葡萄糖摄取;之后,使用Western blot检测发现SFG对L6细胞内GLUT4的表达有显著的促进作用;同时,在可稳定表达IRAP-mOrange荧光蛋白的L6细胞内,使用激光共聚焦显微镜监测SFG作用下葡萄糖转位蛋白4 (glucose transporter 4,GLUT4) 的转位,发现SFG对GLUT4的转位有显著的促进作用,而且SFG对GLUT4转位的促进呈浓度依赖性;另外,免疫荧光实验结果也显示SFG增强L6细胞中GLUT4与细胞膜的融合.这些结果显示利用SFG处理L6细胞后,L6细胞内GLUT4的表达、转运及与细胞膜的融合继而促进葡萄糖的摄取显著增强,说明SFG可能具备开发成一种新的降血糖药物的潜力.     

肌细胞途径血友病B基因治疗的载体优化研究

构建了含有ＭＣＫ增强子,βａｃｔｕｎ启动子,及ｈＦＩＸ内含子１的３个载体Ｇ１ＮａＭＢＡＩＸ,Ｇ１ＮａＭＢＡｉＩＸ,Ｇ１ＮａＰＡＩＸｉ‘ＢＡＭ。转入ＰＡ３１７和成肌细胞Ｃ２Ｃ１２细胞后测定ｈＦＩＸ的表达,发现反向构建的Ｇ１ＮａＰＡＩＸｉ’ＢＡＭ表达最高且最稳定,而正向构建的Ｇ１ＮａＭＢａＩｉｘ的内含子常被剪切,在Ｃ２Ｃ１２细胞中表达不高。     

高效率基因打靶载体的构建及受体成肌细胞的制备

通过建立高效率“双无”（无启动子、 无polyA）打靶载体MSTN-GFP和MSTN neo及新生绵羊和胎儿成肌细胞的培养和鉴定, 优化了培养条件, 改善了细胞状态, 为提高打靶效率及体细胞克隆提供了稳定的核移植供体； 同时无启动子打靶载体的构建也有利于打靶后阳性细胞克隆的分子鉴定.