鱼肉中LMG的分子印迹仿生ELISA检测方法

针对水产品中隐性孔雀石绿(leuco malachite green,LMG)残留的问题,建立了鱼肉中LMG的分子印迹仿生酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法。以LMG为模板分子,在p H=8. 5的Tris-HCl介质中,多巴胺(dopamine,DA)经氧化自聚合4 h即可在微孔板表面形成聚合物膜,经V(甲醇)∶V(乙酸)=9∶1混合溶液洗脱模板分子后,形成LMG分子印迹聚合物膜(membrane of molecularly imprinted polymer,MIP)。以LMG-MIP膜为仿生抗体,建立了鱼肉中LMG残留的仿生ELISA检测方法。该方法灵敏度为5. 18μg/L,检出限达0. 03μg/L。利用隐性结晶紫和孔雀石绿这2种LMG的结构类似物进行方法的特异性试验,交叉反应率为21. 3%。实际样品加标回收实验表明,方法的回收率为71. 8%～73. 5%,RSD≤4. 2%。结果表明,该检测方法可用于鱼肉中LMG残留的快速筛查。     

靶向重组Aif-T18融合蛋白对TEM1阳性肿瘤细胞的杀伤作用的研究

验证Aif-T18融合蛋白对肿瘤内皮细胞标志分子1(TEM1)阳性肿瘤细胞的杀伤作用。采用基因工程技术方法构建重组质粒pIRES-TEM1-EGFP,转染TEM1阴性表达细胞MS1,经G418筛选得到TEM1阳性细胞株(MS1-TEM1);通过构建重组质粒pET302-Aif和pET302-Aif-T18,转化至表达宿主菌BL21中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导菌体得到所需的目的蛋白,采用流式细胞仪和MTT技术检测融合蛋白对MS1和MS1-TEM1细胞的亲和力和特异性杀伤的效果。本研究中,主要利用单链抗体sc FvT18选择性携带凋亡诱导因子AIF,靶向抑杀TEM1阳性细胞,从而为Aif-T18融合蛋白在肿瘤治疗中的开发应用提供实验依据。     

软骨藻酸多克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测法的建立

软骨藻酸(Domoic Acid, DA)是记忆缺失性贝毒(Amnesic Shellfish Poisoning，ASP)的主要成分，能在鱼类、贝类富集，通过食物链的传递作用对人产生毒性作用. DA是小分子半抗原，运用活泼酯法将DA与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联，用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)提高偶联效率，通过紫外-可见分光光度法和聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)检测鉴定，成功制备偶联比为44 : 1的完全免疫抗原DA-KLH和偶联比为16 : 1的包被抗原DA-BSA; 用DA-KLH免疫小鼠后获得高达210 000 units/mL效价的抗血清，并通过不断优化间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测DA的条件，确定各项最佳工作质量浓度及条件，最后成功绘制100 ng/mL~10 μg/mL范围内的DA检测标准曲线.通过优化ic-ELISA检测方法成功实现了快速定量检测DA，这对水产品藻毒素检测试剂盒的开发具有指导意义，也为建立赤潮毒素监督体系提供了良好的实验基础.     

妊娠期母体甲状腺疾病患者 甲状腺功能及免疫指标相关研究

目的探讨妊娠期母体自身免疫性甲状腺疾病(AITD)患者检测血清促甲状腺激素(TSH)、血清游离三碘甲状原氨酸(FT3)、血清游离甲状腺素(FT4)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、血清促甲状腺素受体抗体(TRAb)、IL-17(白细胞介素17)的意义.方法应用化学发光免疫分析法(CLIA)检测妊娠早、晚期4组孕妇血清TSH,FT3,FT4,TGAb,TPOAb,TRAb等甲状腺疾病相关指标,同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测受试者IL-17的水平.结果入组的4组AITD患者TSH,FT3,FT4水平表现出差异性变化,不同诊断的患者甲状腺功能指标均有显著差别. AITD患者的甲状腺自身抗体TCAb、TPOAb、TRAb和IL-17等指标均出现阳性表达,且甲状腺自身抗体水平在不同的AITD疾病类型中出现不同变化,患者IL-17水平变化早于甲状腺自身抗体出现异常变化具有警示意义.结论妊娠期甲状腺功能相关指标、甲状腺自身抗体及IL-17水平与妊娠期母体AITD的诊断及鉴别密切相关,IL-17早于自身抗体出现异常具有提示作用,临床上可采用这些检测指标在孕期全程进行AITD的筛查及监测.     

大理州Rh(D)阴性无偿献血者血清学表型和不规则抗体的调查

目的:了解大理州无偿献血者Rh(D)阴性血型的血清学表现型及不规则抗体存在情况。方法:检测献血者样本136 803例,采用血清学方法确证Rh表现型,使用抗人球蛋白试剂对不规则抗体作筛查。结果:确证Rh(D)阴性献血者209例(0.15%);其中含不规则抗体1例(0.48%),血清学表现型中:ccdee 123例(58.85%),Ccdee 67例(32.06%),CCdee 7例(3.35%),ccdEe 6例(2.87%),CcdEe 5例(2.39%),CCdEe 1例(0.48%)。该阴性献血者ABO血型分布情况AOBAB。结论:对献血者Rh(D)阴性血型的血清学表现型及不规则抗体作检测,将有利于为临床安全及时有效输血提供保障。     

美国野水鸭I型副黏病毒病HI免疫抗体消长规律试验

试验采用鸭副黏病毒GSFY株（A苗）、GSBY株（E苗）油乳剂灭活疫苗和鸡新城疫NH株（N苗）油乳剂灭活疫苗对7d、14d和21d的美国野水鸭分别进行不同剂量和不同次数的免疫,检测各实验组鸭的HI抗体变化情况。结果显示,美国野水鸭分别免疫后,HI抗体A苗21d和E苗14d时分别达4．55log和5．27log以上,维持时间为35～42d以上。N苗除3次免疫组21d时达到4．0log以上维持时间21～28d外,1次和2次免疫组均不能达到4．0log的抗体水平。结果表明,对美国野水鸭作I型副黏病毒病灭活疫苗免疫具有良好的免疫效果,尤以3次免疫为佳．3个不同来源毒株的灭活疫苗以GSBY株油乳剂灭活疫苗的免疫效果最好。     

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白生物仿制药对大鼠类风湿性关节炎的治疗作用

目的:评价重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(TNFR-Fc)生物仿制药对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用.方法:将大鼠随机分成6组:阴性对照组(生理盐水)、阳性药物组(Enbrel)和TNFR-Fc高、中、低质量分数组,空白组(无炎症),每组6只,弗氏完全佐剂(CFA)建立类风湿性关节炎模型.给药13 d后,分别测量大鼠体重、后足足垫厚度,关节炎指数评分,ELISA法测量细胞因子水平.结果:与阴性对照组相比,Enbrel组和TNFR-Fc大、中、小质量分数组的大鼠体质量明显增加(P0.05)、继发性足肿胀减弱(P0.05)、关节炎评分分值、IL-1β、TNF-α、IL-6含量均减小(P0.05),IL-10含量升高(P0.05).结论:TNFR-Fc通过降低炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平以及升高IL-10水平来发挥治疗类风湿性关节炎的作用.     

肺癌患者血清P53抗体及肺癌组织P53表达对肺癌诊断价值的研究

目的探讨肺癌患者血清P53抗体水平及肺癌组织P53表达对肺癌诊断的价值.方法采用ELISA法检测肺癌患者血清P53抗体水平,并采用免疫组化法检测肺癌组织P53表达情况.结果肺癌患者血清P53抗体（17.84±8.73）ng/L水平比正常对照组（5.43±1.90）ng/L显著升高（P〈0.001）,肺癌患者血清P53抗体水平与肿瘤大小、淋巴转移、远端转移、TNM分期有关.肺癌患者癌组织P53表达的阳性率为61.5%（168/273）,肺癌患者癌组织P53阳性表达率与肿瘤大小、淋巴转移、远端转移、TNM分期、分化程度、病理类型有关.结论血清P53抗体水平与癌组织中的表达有着良好的平行关系,测定血清P53抗体水平或检查肺癌患者癌组织P53的表达可对肺癌的诊断、分期、治疗和预后提供重要依据.     

具有两类靶细胞的病毒感染模型的全局稳定性

研究了具有两类靶细胞和CTL免疫应答与抗体免疫反应的时滞病毒感染模型的动力学行为.模型描述了病毒和两类细胞的相互作用:CD4+T淋巴细胞与巨噬细胞.通过构造适当的Lyapunov泛函,使用LaSalle不变性原理,证明了CD4+T淋巴细胞和巨噬细胞的基本再生总数R0、CTL免疫再生数R1、抗体免疫再生数R2、CTL免疫竞争再生数R3和抗体免疫竞争再生数R4决定了模型的全局性态.若R0≤1,病毒在体内清除.若R01,正解在R1≤1,R2≤1时趋于无免疫平衡点,在R11≥R4时趋于CTL主导平衡点,在R21≥R3时趋于抗体主导平衡点,在R31且R41时趋于正平衡点,获得了无病平衡点、无免疫平衡点、CTL主导平衡点、抗体主导平衡点和正平衡点全局渐近稳定的充分条件.