煤工尘肺结核患者肺部细菌感染及耐药性研究

研究淮南矿区煤工尘肺结核患者肺部产超广谱β-内酰胺酶细菌感染及其耐药情况.对从煤工尘肺结核肺部感染患者痰标本分离的132株革兰阴性杆菌进行ESBLs检测,并对产ESBLs细菌进行药物敏感性检测.共计检出产ESBLs细菌31株,占全部测试菌株的23.48%,其中主要包括肺炎克雷伯菌15株,大肠埃希菌13株.产ESBLs细菌对氨苄西林均高度耐药;对头孢噻肟、头孢他定等第三代头孢菌素类也高度耐药;而头孢西丁对产ESBLs肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌有较强的抗菌效果,但产ESBLs铜绿假单孢菌和阴沟肠杆菌对头孢西丁的耐药率却高达100%;除铜绿假单胞菌外的产ESBLs细菌对亚胺培南的敏感率极高;奈替米星、阿米卡星及氧氟沙星、环丙沙星对产ESBLs细菌抗菌作用较弱.淮南矿区煤工尘肺结核患者肺部产ESBLs细菌感染以产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌引起的肺部感染为主要要致病菌,亚胺培南可作为治疗产ESBLs细菌(铜绿假单胞菌除外)的首选药物,临床应采取措施以预防产ESBLs细菌肺部感染的发生.     

58例肺结核患者肺功能分析

目的：探讨肺结核对肺功能的影响。方法：回顾分析58例肺结核患者的肺功能。结果：浸润型肺结核肺功能大致正常，慢性纤维空洞型肺结核肺功能普遍异常。结论：肺结核的肺功能障碍呈混合性。     

特异性抗体和特异性免疫复合物的检测对结核病的诊断意义

以ＥＬＩＳＡ检测１０８例活动性肺结核、３９例稳定期肺结核、３０例肿瘤、１０１例非结核性肺部疾病患者及２０２例正常人血清的抗结核菌纯蛋白衍生物（ＰＰＤ）ＩｇＧ抗体（简称抗－ＰＰＤ）和循环免疫复合物（ＣＩＣ）中的抗－ＰＰＤＩｇＧ抗体（简称ＣＩＣ－ＰＰＤ）。结果表明，活动性肺结核患者的抗－ＰＰＤ和ＣＩＣ－ＰＰＤ水平明显高于正常人和各疾病组患者的水平（Ｐ＜０．００１），但与其病变范围无关。单一测定活动性肺结核患者的抗－ＰＰＤ，敏感性为８５．２％，特异性为９８．５％；测定ＣＩＣ－ＰＰＤ，敏感性为８６．１％．特异性９６．９％。以两者任一项阳性作为诊断活动性肺结核的标准，则敏感性为９３．５％。此外，对１１例活动性肺结核患者的动态观察表明，随着治疗天数的增加和临床症状的改善，患者的抗－ＰＰＤ和ＣＩＣ－ＰＰＤ水平会逐渐降低，前者于治疗后第２０～２４周降至正常水平，后者则于治疗后第１２～１６周降至正常值。研究结果提示测定患者的抗－ＰＰＤ和ＣＩＣ－ＰＰＤ的水平，可用于结核病诊断，对结核病的疗效判定亦有帮助。     

Construction of multivalent DNA vaccines forMycobacterium tuberculosis and its immunogenicity

The coding regions of Ag85B MPT-64, and ESAT-6 secreted proteins were cloned initially into the eukaryotic expression vector pJW4303, then transformed to E. coli Top 10 strain for plasmid DNA extraction and further analysis. Plasmids containing the right insertion were sequenced to confirm their identity. COS7 cells were transfected with a mixture containing serially diluted plasmid DNA encoding three secreted proteins and Lipofectin (Gibco). The supernatants and pellets prepared from various cell lines were run on SDS-PAGE gel and the expression of these proteins in COS7 cells were demonstrated by immunoblot using polyclonal or monoclonal antiserum of M.TBH37Rv. 21 days after first vaccination of C57BL-6 mice by all three recombinant eukaryotic expressing vectors, antibody titer for Ag85B reached 1∶3200. 21 days after second vaccination, the antibody titer reached 1∶102400. The highest antibody levels induced by multivalent vaccines after the second injection were equal to or even greater than the highest antibody levels of single DNA vaccine reported in literature after third injections. Antibody titer of MPT-64 was 1∶50 after the first injection and it reached 1∶200 after the second injection. No antigen-specific antibody against ESAT-6 was detected in sera harvested from immunized mice 21 days after both injections. Antigen-specific IFN-g level of Ag85B was 110 pg/mL while no antigen-specific IFN- g level of ESAT-6 and MPT-64 was detected even after third injections. To our knowledge, it is the first time that studies of polyvalent recombinant DNA vaccines against TB were carried out in C57BL-6 mice. Our results indicated that multiple DNA vaccines could be used to enhance protective responses against M.TB.     

老年肺结核病临床研究

统计分析了住院期间老年肺结核病２１４例,对其患病率,合并症,误诊情况进行了分析,提出了老年肺结核的临床特点,对可疑患者应认真及时检查,早诊断,早期治疗,减少误诊,提高治愈率。     

结核分枝杆菌H37Rv株与耐异烟肼菌株间细胞壁蛋白质组双向电泳图谱比较

利用双向电泳技术可以对体外培养的结核分枝杆菌非耐药型菌株和耐药型菌株进行细胞壁蛋白质组学比较,寻找与耐药相关的蛋白质．结核分枝杆菌H37Rv株与耐异烟肼菌株在Middlebrook 7H9 Broth培养基中37℃摇床培养1个月后,从培养物中提取结核分枝杆菌细胞壁蛋白．以pH4～7的IPG预制胶条为第一向等电聚焦,以SDS-PAGE为双向电泳第二向,经过银氨染色,图像扫描后,利用软件分析处理图像．在结核分枝杆菌H37Rv株和耐异烟肼菌株的细胞壁蛋白质凝胶图谱中分别检测出499和582个蛋白质斑点．它们的蛋白质分子质量分布基本相似,其中有102个斑点差异显著．这为研究耐异烟肼菌株的耐药机制提供了蛋白质组学方面的信息．     

ICP-AES比较临床分离药物敏感和耐药结核分枝杆菌的金属离子

利用现在多元素痕量分析最重要的方法——电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP—AES)分析结核分枝杆菌中的金属离子的种类和含量,结果表明,Cr^3 ,Al^3 ,Ca^2 ,Fe^2 ,Mn^2 ,Co^2 ,Cu^2 ,Ni^2 的含量较高,并发现药物敏感菌株和耐药菌株之间在金属离子种类和含量上有明显区别．这种差异在耐药中的意义有待进一步研究．     

一类具有转移和治疗机制的随机结核病模型的平稳分布与灭绝

考虑一类具有转移和治疗机制的肺结核传播模型在随机扰动下的动力学行为. 首先, 通过Lyapunov分析方法得到该模型正解的存在和唯一性； 然后利用Has’minskii理论证明该模型存在唯一的平稳分布； 最后通过随机分析方法得到该模型疾病消失的条件.     

四川省结核分枝杆菌基因分型中MIRU-VNTR位点稳定性评价

摘要: 本文收集四川省2009-2013年184株结核分枝杆菌菌株，用标准12 MIRU-VNTR位点组对四川省结核分枝杆菌菌株进行基因分型研究，评估四川地区一线VNTR分型位点的稳定性，确定四川地区保守位点组合及主要MIT型。184株结核分枝杆菌基因分型后得到51个基因型，12个基因型成簇。本研究确定当前四川地区12高分辨力位点VNTR分型方法中的7个MIRU位点依然具有较高的分辩能力（h > 0.55）。MIRU02, MIRU20, MIRU23, MIRU24为多态性最低的4个位点（0 ≤ h < 0.4），保守位点组的主要MIT型为“2251”。四川省结核分枝杆菌VNTR位点的多态性保持稳定，目前采用的12高分辨力VNTR位点依然稳定可靠，本研究首次确定了四川地区保守位点组及主要MIT型，为下一步结核分枝杆菌进化研究奠定了基础。     

r结核分枝杆菌PhoP／PhoR基因重组穿梭表达质粒的构建及鉴定

为构建结核杆菌PhoPR双组分系统PhoP、PhoR基因的重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR并对其进行鉴定。采用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA为模版,利用PCR技术分别扩增PhoP、PhoR基因编码序列,先克隆于T—Vector pMD19（Simple）,再亚克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV361,并转化E.coli DH5α感受态细胞,提取所得的阳性克隆子获得重组表达质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,通过PCR及双酶切鉴定。结果显示,结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA中扩增出的PhoP、PhoR基因与GenBank公布的序列一致,经过PCR及双酶切鉴定,表明PhoP、PhoR基因均成功插入了pMV361穿梭载体。由此可知,成功构建了重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,为进一步研究PhoPR双组分系统奠定了基础。