棕色固氮菌的氢酶初步研究

棕色固氮菌(Azotobacser Vinelandii—230)中与固氮酶共存的氢酶属于单向吸氢的氢酶,其中以粒子态存在者约占其总活力的78％,可溶态占22％。此二态酶对冷热稳定,最适反应温度和利用多种电子受体吸氢等方面均相似,但在耐热性、温度曲线的形式及对某些电子受体的亲和性方面有些差异。乙炔、Na~+离子及氧对酶的吸氢活力有抑制作用。菌体的氢酶活力,有氨培养比无氨培养的低86％左右;大量氨培养的UW—45菌体仍有氢酶活性,但比氨耗尽的UW45菌体低55％左右。钨代替钼培养的菌体无固氮酶活性,其粗提液氢酶活性也极低。由此可见,氢酶活性与固氮酶活性有极为密切的关系。     

固定化棕色固氮菌的固氮酶活性

比较了用海藻酸钠、琼脂、聚丙烯酰胺、K-卡拉胶和明胶包埋法及DEAE-纤维素吸附法固定化的固氮菌的乙炔还原活性,表明海藻酸钠包埋的菌体固氮酶的活性最高、持续时间也最长,琼脂包埋的次之.菌体悬液(10~(20)/ml)与海藻酸钠(4％)的配比以1:5为佳。其固定化菌体的乙炔还原活性的最适pH为7.5,最适温度为32℃,Km为20μM,活化能为10.29kcal/mol,Vmax为14.2μM.丙二酸,2,4-二硝基酚,叠氮化钠,磺基水杨酸,硫酸铵,硝酸钾,高浓度亚硝酸钠有抑制作用,而低浓度亚硝酸钠有刺激作用,CO_2对其乙炔还原和放氢有抑制作用,CO对其放氢无抑制作用.其乙炔还原的最适氧分压为10kPa.     

花生根瘤菌某些菌株在自生条件下的吸氧活力

用气相色谱法和亚甲蓝去色反应检测29个花生根瘤菌菌株的吸氢性能,只有5个菌株能吸氢·吸氢活力最高为689n mol H_2/mg prot.h.选试的四种培养基中以吸氢培养基对根瘤菌株吸氢活力效果最好,在该培养基中菌株不表现固氮酶活力.在不固氮情况下,外源氢是诱导吸氢活力的必需条件.培养基中的碳源浓度对菌株吸氢活力有明显的影响,高浓度的碳源抑制吸氢.一氧化碳和乙炔对菌株L8 3吸氢的抑制程度比菌株35_1小得多.     

循环伏安法研究棕色固氮菌固氮酶组分性质

用循环伏安法研究固氮酶国内外尚未见报道。木工作在不加电子传递体的情况下,用该法研究了棕色固氮菌的钼铁蛋白(Av1)和铁蛋白(Av2)的某些性质。 所用菌株为棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii)野生型菌株op或230,以及不能合成FeMoco的缺陷型菌株UW-45。Av1和AV2的分离、纯化及活性如前文所述。 循环伏安法采用叁电极系统,及前文所述仪器,在-590到470mV内进行扫描,     

化学模拟生物固氮——Ⅺ 固氮酶铁钼辅基模拟物的生物活性

据固氮酶厦门模型Ⅱ合成的固氮酶铁钼辅基模拟物与缺陷型棕色固氮菌uw-45提取液重组后,在完全的酶促反应条件下,具有明显的生物催化活性,其还原乙炔为乙烯的转化数通常在3—6(分~(-1))之间,相当于天然铁钼辅基活性的1—2％左右;还原分子氮为氨的转化数在1.5—3(分~(-1))左右,可用普通微量氨扩散法和Nessler比色法检出。重组模拟物的乙炔转化数与氮转化数之比值符合于棕色固氮菌活性固氮酶相应的转化数之比。经柠檬酸盐处理后,以氯为外配位基的模拟物的重组活性可显著提高。     

金定麻鸭鸭蛋形成过程中的物质积累

本文利用放射性同位素示踪法对金定麻鸭鸭蛋形成过程中的物质积累作了考察.这个高产品种的经产鸭,卵球的成长约需7-8天.称重法和示踪法一致证明,在卵球成长的中、后期,卵黄物质的积累率达于最高,末期则逐渐降低,直至排卵前3-5小时积累停止.新开产鸭卵球成长时间较长(多3天),物质积累率也较低.用~(32)P和~(35)S标志的氨基酸作示踪剂,实验结果表明,卵球成长的中、后期加速积累的物质主要是磷脂类和蛋白质.实验表明注射人血液的示踪剂很快被利用于合成卵黄物质.母鸭还能够迅速利用血浆中的示踪物质合成蛋清;开产鸭比较产鸭的转换速率略为低些.母鸭蛋壳形成历时十多小时;直至产蛋前几十分钟~(32)P仍可沉积于蛋壳. 根据实验结果,对生产上提出了几点建议.     

棕色固氮菌钼铁蛋白的结晶及其氧化还原电位的研究

本文叙述棕色固氮菌固氮酶钼铁旦白的分离和结晶方法。降低固氮酶提取液的离子强度,可获稠密的暗棕色钼铁旦白结晶。钼铁旦白的晶体为针状。其比活性为1643毫微克分子乙烯形成分钟毫克旦白。用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,重结晶的钼铁旦白达均一的纯度。 结晶纯的钼铁旦白用染料平衡法测定,其氧化还原电位为-54mV,每个钼铁旦白分子传递电子数(n)为3.9～4。此电位对比固氮过程中的Fd和固氮酶的铁旦白来说是太正;然而它与半还原态变为氧化态的钼铁旦白的电位值基本是一致的。     

固氮酶铁钼辅基的激光喇曼光谱和电子光谱特性

??色固氮?(A.vinclandii-230)相???分离的???基(FeMo-co),以NMF为溶剂,经Sephadex LII-20凝???析,或在20 000xg下离心30 min的上清液,不含任何的氨基?,研究了FeMo-co的?光?曼光谱和电子光谱,对FeMo-co中含有与S配基耦合的S-S配基的可能性进行了讨论。