抗SARS-CoV人源Fab抗体的表达及鉴定

为进一步研究抗SARS-CoV刺突蛋白S(Spike)的中和抗体2g7,对其进行了原核表达,将2g7转入琥珀突变的非抑制性菌株(SupE-)的大肠杆菌Top10F'中进行可溶性表达。用HPLC纯化后,SDA-PAGE显示2g7的轻重链均存在,ELISA,Westernblot检测显示2g7能与SARS-CoV的S1蛋白结合。BIAcore测定其与抗原的亲和力为2.67×10-8mol。竞争ELISA显示该抗体能与SARS-CoV刺突蛋白S(Spike)结合并阻断该蛋白与其受体ACE2的结合。实验结果表明:利用免疫噬菌体抗体库能在小库容的情况下筛选获得高亲和性的人源抗体,并可以在大肠杆菌中获得高效表达,这一实验结果为有效性地防治病毒性疾病提供了思路。     

浅谈生物技术在焦化废水处理中的应用与展望

焦化废水是一种氨氮和有机物浓度较高的工业有机废水,成分复杂,降解困难。该文对生物法处理焦化废水工艺的发展与最新技术进行了回顾与评述,通过比较对生物法处理焦化废水提出了新的展望。     

SARS-CoV刺突蛋白受体结合区的表达及高潜在中和性人源抗体的制备

为表达SARS-CoV刺突蛋白S(Spike)受体结合区(RBD)并从中筛选高潜在中和性人源抗体,我们用原核表达并纯化的SARS-CoVSRBD进行抗体库的筛选。从多个曾患SARS的健康人血中获得淋巴细胞,PCR扩增全部抗体基因,插入Pcomb3x载体中,构建抗SARS病毒人源噬菌体抗体库。利用噬菌体表面呈现技术,从中筛选结合SARS-CoVSRBD的人源抗体并用ELISA及Westernblot鉴定阳性克隆,竞争ELISA检测人源抗体阻断SARS-CoVSRBD与其受体ACE2的结合情况。结果为构建了库容量6.2×107的免疫Fab噬菌体抗体库,重组率为75%,从中筛选获得9株特异抗SARS-CoVSRBD的人源Fab抗体,ELISA及Westernblot检测均为阳性。其中有一株能阻断SARS-CoVSRBD与其受体ACE2的结合。本实验结果表明:人源抗SARS-CoVSRBD基因工程抗体的获得,一方面将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径,同时也提示SARS-CoV亚单位疫苗可以用于SARS疾病的预防。