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1.
为了了解在毕赤酵母中人骨形态发生蛋白4基因剂量对其表达量的影响,利用毕赤酵母表达载体pAO815质粒上的2个同尾酶BglⅡ和BamH Ⅰ在体外构建了人骨形态发生蛋白4成熟肤序列1,3,6,9个拷贝表达盒,并对它们进行表达量研究.结果表明,在毕赤酵母中表达人骨形态发生蛋白4蛋白时,1个拷贝基因能达到最大表达量,增加人骨形...  相似文献   
2.
牙髓干细胞(dental pulp stem cells,hDPSC)是牙源性的间充质干细胞,具有多向分化潜能.已有的研究表明,一些蛋白因子能够诱导牙髓干细胞的牙向分化,但尚无通过过量表达某些关键基因来诱导牙髓干细胞牙向分化的报道.利用绿色荧光蛋白作为报告基因,探究慢病毒介导的外源基因在牙髓干细胞中的表达,分离并鉴定人的恒牙牙髓干细胞,用携带绿色荧光蛋白标记的慢病毒原液感染DPSC,感染病毒后的DPSC进行传代以验证外源基因的稳定表达,并将感染慢病毒后的DPSC与羟基磷灰石/磷酸三钙(hydroxyapatite/tricalcium phosphate,HA/TCP)混合移植到小鼠肾囊膜下培养8周.结果表明:用绿色荧光蛋白标记的慢病毒能够整合到牙髓干细胞的基因组中并获得稳定的表达,感染慢病毒前后的牙髓干细胞增殖率没有发生改变,感染病毒的hDPSC与HA/TCP混合移植到肾囊膜下仍能够产生牙本质牙髓样结构,因此利用慢病毒载体介导的绿色荧光蛋白并不影响牙髓干细胞的生物学特性,说明在进一步利用慢病毒载体研究过量表达基因在牙髓干细胞牙向分化的作用中,绿色荧光蛋白可以作为标记蛋白.  相似文献   
3.
重组葡激酶(r-Sak)工程菌发酵工艺的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
通过对影响重组葡激酶表达的几个主要因素的研究,建立了较为适宜的发酵条件:接种量4%;初始pH7.2;在A600nm=2.5时加20%蔗糖诱导,诱导后4~5h收获,发酵液上清r-Sak含量可达到250mg/L以上,酶活力可达到6500RU/ml以上。  相似文献   
4.
一种简单实用的鲎试剂检测细菌内毒素法   总被引:1,自引:0,他引:1  
在鲎试剂检测内毒素原理的基础上对传统的凝胶法进行改良。经改良后的新方法与传统方法相比具有检测结果一致,鲎试剂用量少,检测时间短,操作误差小等优点。  相似文献   
5.
利用人骨形成蛋白-4(hBMP4)与人骨形成蛋白-7(hBMP7)的成熟肽cDNA片段制备转基因毕赤酵母菌株,实现了hBMP4与hBMP7在巴斯德毕赤酵母细胞中的共表达.Western-blotting分析表明,表达产物含有hBMP4与hBMP7,片段大小分别为26 kD和17 kD,均为单体蛋白.  相似文献   
6.
试图建立人骨形态发生蛋白-4在毕赤酵母(Pichia pastoris) 中的表达技术.包括:将hBMP4成熟片段从全长cDNA亚克隆到分泌型表达载体质粒pPIC9K多克隆位点上,构建能表达rhBMP4的载体质粒pPIC9K-hBmp4.经转化Pichia pastoris宿主菌株GS115,PCR鉴定基因整合后,摇瓶培养,用甲醇诱导表达.表达上清液经SDS-PAGE和Western-blot 分析,结果表明rhBMP4以单体形式分泌到发酵上清液中,单体分子质量大小约为26 ku,摇瓶表达量达到20.13 μg/mL.  相似文献   
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