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重组人粒细胞集落刺激因子在Escherichia coli中的表达研究 总被引:4,自引:0,他引:4
根据人天然粒细胞集落刺激因子(G-CSF)基因序列设计出引物,通过RT-PCR从人外周血单个核细胞mRNA获得G-CSFcDNA片段,将该片段与原核表达载体pT7构建成重组体,导入大肠杆菌后发现天然G-CSFcDNA表达量并不理想,这可能是由于天然hG-CSF5’端G+C的比例过高,使转录后的mRA很容易形成二级结构而影响翻译起始,因此在大肠杆菌中很难获得高效表达,根据密码子简并性原则,在不改变编码氨基酸顺序的前提下,通过重新设计PCR引物,将hG-CSF的前3个氨基酸密码子中的几个GC碱基作了改动,获得了新的cDNA突变体,将其与PT7的重组导入大肠杆菌,获得了高效表达。 相似文献
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