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将人细胞周期蛋白D1全长cDNA克隆入原核表达载体pET-28c(+)中, 经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株. 该菌株经IPTG诱导高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白, 表达量占菌体总蛋白的23%. 包涵体经洗涤和溶解, 在变性条件下利用Ni2+螯合柱纯化、 尿素梯度复性后, 得到纯度达98%以上的纯化蛋白. SDS-PAGE显示纯化蛋白的分子量约为43 000, Western-b
lot分析表明, 在相应分子量处有一特异性条带, 说明成功表达和纯化重组人细胞周期蛋白D1. 相似文献
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