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大肠杆菌ppsA,pckA基因的克隆与串联表达 总被引:3,自引:0,他引:3
磷酸烯醇丙酮酸合成酶(ppsA)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(pckA)是糖代谢中心途径中生成磷酸烯醇丙酮酸(PEP)的2个关键酶,在大肠杆菌中分别由ppsA和pckA基因编码,首先用PCR方法从大肠杆菌K12菌株基因组DNA扩增得到了ppsA和pckA基因,并将ppsA,pckA以单独或串联的方式克隆到大肠杆菌表达质粒pλPR上,构建成的质粒pλPR-ppsA,pλPR-pckA,pλPR-ppsA-PckA导入E.coli P2392菌株中表达,结果表明,ppsA,pckA基因的单独表达使宿主细胞的ppsA和pckA酶活力分别提高到5.2和2.5倍,串联表达使宿主细胞PAt和PckA酶活力分别提高到3.1和2.3倍,还使得以PEP为底物合成的3-脱氧α-阿拉伯 酮糖-7-磷酸(DAHP)产量提高到2.1倍,2个基因串联表达比单个基因表达更有利于提高DAHP的产量。 相似文献
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为了对大肠杆菌中由aroG基因编码的3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶(DAHP合成酶)进行结构与功能的深入研究,尝试了aroG基因在枯草杆菌中的表达。表达载体以pUB110为骨架,采用了枯草杆菌热激蛋白groESL基因的启动子,碱性蛋白酶subtilisin基因的信号肽和N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸酰胺酶cwlHB基因的转录终止子,将aroG基因在枯草杆菌WB600宿主菌中进行了分泌表达 相似文献
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