透明质酸合成酶2真核表达载体的构建及表达

构建了透明质酸合成酶2真核表达载体,并观察其在真核细胞中的表达。利用RT-PCR法从MG63细胞总RNA中扩增,获得人透明质酸合成酶2cDNA,并克隆至真核表达载体pEGFP-N3,将经双酶切鉴定和DNA测序证实的阳性重组子命名为pEGFP-N3-HAS2。脂质体法转染HEK293细胞,用倒置荧光显微镜检测、分析其在HEK293细胞表达及定位。双酶切鉴定和DNA测序证实成功构建pEGFP-N3-HAS2真核表达载体。转染HEK293细胞后可见HAS2-EGFP融合蛋白高表达并定位于浆膜。该载体的成功构建为进一步探讨透明质酸合成酶2在治疗骨性关节炎、修复关节软骨缺损中的应用价值奠定了基础。     

聚甲基丙烯酸甲酯颗粒诱导假体周围骨溶解的实验研究

通过破骨细胞培养及动物模型,探讨颗粒诱导假体周围骨质溶解的机制。取SD仔鼠骨髓细胞,在聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)颗粒的刺激下,进行体外破骨细胞培养,然后行TRAP染色,观察颗粒对破骨细胞形态的影响;对骨片上形成的骨吸收陷窝行甲苯胺蓝染色观察并计数。选用24只BALB/c小鼠,在小鼠颅骨部位注入PMMA颗粒,建立骨吸收动物模型。按照注入颗粒的不同随机分为2组,即实验组和对照组,每组12只。2周后处死动物并取材,行HE染色、TRAP染色及TNF-α免疫组化检查。结果显示,PMMA颗粒在体外条件下实验组TRAP染色阳性细胞数及骨吸收陷窝数均较对照组多。动物模型结果显示实验组有明显的骨吸收现象,而对照未发现明显的骨吸收;免疫组化检测亦显示实验组TNF-α较对照组明显。说明PMMA颗粒可诱导假体周围骨质溶解,继而引发假体松动。