DNA的识别分子及其识别模式

固有免疫以TLR9依赖和TLR9非依赖的方式对DNA识别,在保护性免疫和病理性自身免疫反应中发挥重要作用。目前发现TLR9,DAI（DLM-1／ZBPl）,RIG—I,尚未定义的识别B—DNA的分子,损伤DNA结合分子如：DNA—PKCS,Ku70,p53,ATM,ATR和含有SAP或PHD结构域等的分子可以识别DNA,并且分别以不同的识别模式识别细胞不同部位或不同类型的DNA。近几年来国内外针对DNA识别的研究较多并取得了重要进展,给研究保护性免疫和自身免疫提供了新的视野。文中结合作者所在实验室的研究探索,对DNA的识别分子和识别模式的研究进展进行综述。     

可溶性人干细胞因子的原核表达和纯化

用Trizol提取人骨髓总RNA，通过RT-PCR扩增人干细胞因子DNA，克隆到pMD18-T载体中并测序．将其定向连入原核表达载体pET32a( )，获得了重组表达载体pET32a( )／hSCF，其cDNA长度为504bp，测序结果与已知序列吻合．然后在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达，获得37kD的融合蛋白，约占菌体总蛋白量的30％．经Ni^2 -NTA树脂亲和层析柱纯化获得纯度大约90％的重组蛋白．     

人神经营养素-4基因的原核表达与纯化

以人外周血淋巴细胞基因组DNA为模板，用PCR方法扩增出神经营养素-4基因(NT-4)成熟蛋白的DNA序列，并将其克隆到表达载体pET32a中，在大肠杆菌BL21(DE3)中经异丙基-β-D-半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside，IPTG)诱导后高效特异表达了分子量约为35kD的蛋白，诱导表达的蛋白主要存在于包涵体中，经Ni^2 -NTA树脂亲和层析纯化，得到了纯度达94％的NT-4成熟蛋白的融合蛋白．为进一步研究NT-4的生物学活性及在临床治疗中的作用打下了基础．     

增强型绿色荧光蛋白基因真核表达载体的构建

构建增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)基因的真核表达载体pCDNA3．1( )-EGFP，转染至培养的Hela细胞中成功表达，并发出绿色荧光，证明EGFP一种良好的报告基因和筛选标记．