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1.
目的:基于Cre-Lox P系统构建携带EGFP及Puromycin抗性基因,并带有巨细胞病毒(CMV)及翻译延伸因子1α(EF1α)双启动子的新型慢病毒表达载体,为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒载体系统.方法:以已经插入Lox P序列的p LOX-TERT-ires TK慢病毒载体为模板,用Spe I与Kpn I进行双酶切,去除TERT-ires TK片段,然后与人工设计合成的多克隆位点片段连接,构建p LOX-MCS表达载体.同时,以p B513载体为模板扩增EF1α-EGFP-Puro表达框(带有Bam HI及Kpn I酶切位点),然后与经过Bam HI及Kpn I双酶切的p LOX-MCS载体连接,进而构建p LOX-CMV-EF1α-EGFP-Puro(简称p LOX-CMV-E/P)载体.将p LOX-CMV-E/P载体与慢病毒包装载体p CMVR8.74及p MD2.G共转染293T细胞,包装病毒进行报告基因的功能分析.结果:菌落聚合酶链式反应(PCR)、酶切鉴定及测序结果均与预期结果一致,绿色荧光蛋白及抗药性基因均有较好的活性与功能.结论:成功构建了p LOX-MCS及p LOX-CMV-E/P慢病毒表达载体,为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒表达系统.  相似文献   
2.
大花蕙兰快速繁殖体系的初步建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
探讨了4种大花蕙兰外植体诱导原球茎形成的效果和不同激素配比对茎尖原球茎诱导及增殖与分化培养的影响。结果表明:诱导原球茎适宜外植体为茎尖,培养60 d后诱导率达到76.0%。而其他3种外植体均不能有效诱导原球茎形成;其中0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA激素组合诱导茎尖原球茎形成率达到87.8%;而茎尖原球茎在各激素组合处理中增殖率均能达到100%。原球茎在1.5 mg/L KT+0.5 mg/L IBA激素组合中增殖与分化效果最好,增殖系数和分化系数分别达到5.19和2.80。  相似文献   
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