猪淋巴细胞白细胞介素-6(PIL-6)基因的克隆和序列分析

将猪外周血淋巴细胞进行体外培养，在Con A的刺激下培养48h后，提取培养的淋巴细胞总RNA，应用RT－PCR扩增猪淋巴细胞白细胞介素－6基因（PIL－6），并克隆到pUC18载体测序。结果发现，PIL－6的cDNA长度为741bp，开放阅读框为636bp，编码212个氨基酸，分子量24kD，等电点5.5；其46－129bp编码PIL－6的信号肽序列，130－681编码PIL－6成熟肽的序列。     

猪白细胞介素-6基因的原核表达及其活性研究

用DNA重组技术，将已克隆的猪IL－6 cDNA片段插入pGEX-1λT质粒，转化大肠杆菌，以BamHI和Pst I酶切鉴定重组子，以IPTG诱导融合蛋白表达，并作RT－PCR及SDS－PAGE分析表达情况，从聚丙烯酰胺制备凝胶中回收融合蛋白，用MTT法测定重组蛋白刺激小鼠脾淋巴母细胞增殖反应的活性，并免疫家兔制备高免血清，得到高效表达猪IL－6的质粒pGPIL-6,RT-PCR确证pGPIL-6在大肠杆菌中能正确转录，经SDS－PAGE分析表达蛋白分子量为49kD，融合蛋白具有较高的促小鼠淋巴细胞增殖反应活性，以此免疫家兔，可制备滴度为1：128 000的兔高免血清。