重组人尿激酶原药代动力学的研究

第一部分 :采用交叉设计 ,自身比较 ,研究了猕猴静脉注射 0 .4 ,0 .8和 3.2mg·kg- 1 重组人尿激酶原 (rhprouk)或 1.2 8× 10 5IU·kg- 1 尿源性天然尿激酶 (un UK) (其中推注 15 %剂量 ,90min内恒速滴注 85 %剂量 )后血浆中单链尿激酶型纤溶酶原激活剂 (scu PA)和双链尿激酶型纤溶酶原激活剂 (tcu PA)的浓度随时间变化、代谢转化和各自的药代动力学 ,及代谢转化和药代动力学参数与剂量浓度的依赖关系 .结果表明给药后scu PA转化为tcu PA的速度与scu PA的剂量呈正相关性 .第二部分 :通过测定兔静脉推注加滴注1 2 5I rhprouk 0 .8mg·kg- 1 (其中 15 %剂量静脉推注 ,85 %剂量在 90min内滴注 ,比放射活性 2 .5 0 6MBq/mg)后不同时间体内各组织总放射性、TCA酸沉放射性 ,以及酸沉和总放射性的比值 ;胆汁引流物放射性累计排出量 ,尿和粪中累计排出量 ,及在体内外1 2 5I rhprouk与血浆蛋白的结合 .研究rhprouk在体内的分布、代谢及排泄情况 .结果表明rhprouk不与血浆中蛋白结合 ,代谢部位主要集中在胆、肾等部位 ,代谢产物主要随小便排出 .     

重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体基因的克隆及工程菌的构建与鉴定

利用RT-PCR技术,从人脐带静脉上皮细胞中克隆人组织型纤溶酶原激活剂基因,将其接入TA克隆载体PCR2．1中,经DNA序列测定后,以该重组质粒DNA为模板,用PCR方法获得了人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)基因,将其转入pET29a,构建了重组表达质粒pET29a／K2tPA,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,构成工程菌．经IPTG诱导表达,在40kDa处有一明显表达条带,表达量为约占菌体总蛋白的20％．该菌种在贮存与复苏及传代过程中具有良好的质粒稳定性和表达稳定性．     

重组人尿激酶原一般药理学研究

试验结果显示 :尿激酶原 (prouk) 2 2 .5万IU/kg、4 5 .0万IU/kg和 90 .0万IU/kg3个组、赋形剂组和生理盐水组动物尾静脉注射给药 ,对小鼠一般行为活动表现和自发活动次数均无明显影响 .prouk 2 2 .5万IU/kg、4 5 .0万IU/kg和 90 .0万IU/kg三个组、赋形剂组和生理盐水组动物尾静脉注射给药 ,对大鼠一般行为活动表现均无明显影响 ,均能在旋转棒上协调平衡运动 .此外 ,给药后 2 0min ,三个剂量组大鼠凝血时间虽有延长 ,但与生理盐水组或赋形剂组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) .prouk 11.2 5万IU/kg、2 2 .5 0万IU /kg、4 5 .0 0万IU/kg三组静脉滴注给药 ,麻醉犬的ECG、HR、呼吸均无明显改变 ,与赋形剂组比较无显著性差异 .但prouk高剂量组动物的SAP、DAP、MAP在给药 10～ 15min时短暂下降 ,这些反应在给药 30min后均恢复正常 .结果表明 ,prouk在受试剂量范围内对小鼠、大鼠精神神经活动和大鼠的凝血时间等均无明显影响 ,在 4 5 .0 0万IU/kg剂量时对麻醉犬有短暂的降低血压的作用     

重组人尿激酶原急性毒性和长期毒性的研究

（1）重组人尿激酶原（prouk)单剂量分别经静脉和腹腔注射给药均未侧出小鼠的LD50,因此改作其最大给药量。结果表明,prouk单剂量经静脉及腹腔注射给药小鼠的最大给药量不低于9,000万IU／kg。（2） prouk 36.0万IU／kg、67．5万IU/kg、135．0万IU／kg和270．0万IU／kg四个剂量组连续给食蟹猴静脉滴注14d,每组4只猴,雌雄各半。实验过程中未见动物死亡。prouk36．0万IU/kg剂量组的食蟹猴给药期及恢复期,精神状态良好,一般行为活动正常,体重、分泌物、食欲及摄食量、心电图、血常规、血液生化、体表观察、尿常规和粪便隐血试验等基本正常,无明显变化。给药第14天和恢复期的脏器系数与病理组织学检查表明,动物的脏器、组织均未见由药物引起的异常病理改变,在生理盐水组或赋形剂组之间比较均无明显差异。而prouk67．5万IU／kg、135．0万IU／kg、270．0万IU／kg剂量组的食蟹猴出现皮下出血、充血、紫癜、尿、粪便隐血反应阳性、贫血以及心率加快等症状。给药期及恢复期,血清中检测出少量prouk抗体。结果表明,prouk的无毒安全剂量不低于36．0万IU／kg。