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纳豆激酶基因克隆及其在大肠杆菌中活性表达研究 总被引:5,自引:1,他引:5
以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增了纳豆激酶基因(natto kinase gene)中编码前肽、成熟肽的核苷酸序列(pro-NK),构建大肠杆菌表达质粒pTYB102,转化大肠杆菌ER2566。在IPTG诱导下,分别在15℃(14h)、30℃(3h)、37℃(2h)条件下培养,pTYB102均能表达出有活性的纳豆激酶。实验证实纳豆激酶基因得到活性表达需要Pro序列。SDS-PAGE表明,15℃和30℃和37℃培养表达的杂蛋白更少。薄层扫描测定表达的纳豆激酶占菌体总蛋白30%以上。 相似文献
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透明质酸产生菌的紫外诱变及摇瓶条件的优化 总被引:4,自引:0,他引:4
对马疫链球菌SH-0进行紫外诱变,筛选出溶血素和透明质酸酶双缺陷型突变菌株SH-2,使透明质酸产量提高5倍;突变株经5次传代,其产酸量及HA的相对分子质量保持稳定.经过发酵条件的优化,确定最佳摇瓶条件是初始pH7.6,发酵温度37℃,发酵时间44h. 相似文献
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通过感受态细胞的生长状态、转化温度及不同的电击杯内径、电压等影响电转化的重要条件,探讨索了大肠杆菌JM109菌株电转化的最优条件.在感受态细胞OD600值为0.5-0.7,转化环境温度为4℃,电容25 μF、并联电阻200 Ω、电压2.5 kV和0.2 cm电击杯电转化效率最高,可达到9.12×108. 相似文献
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将已构建好的表达载体pTYB102转化大肠杆菌,经IPTG诱导,表达出以可溶形式存在的有活性的纳豆激酶.首先对表达条件进行优化,最佳诱导温度是15℃,最佳诱导时间是10h.然后将离心收集到的菌体通过超声波破碎、硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100柱层析以及冷冻干燥等步骤进行分离纯化,得到电泳纯的有溶栓活性的纳豆激酶.冷冻干燥品在SDS—PAGE上呈一条蛋白质带.纯化倍数35倍,纯酶比活1147.54.该酶的最适反应条件是45℃,pH8.0.酶活性在pH6.0~11.0,55℃以下稳定. 相似文献
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在总路线,大跃迸,人民公社三面红旗的光辉照耀下,为了坚决贯彻党的教育方针,大力提高教育质量,我们对分析化学教学体系迸行了彻底的改革,使这一课程符合了总路线和新教育方针的精神,基本上适应了社会主义建设和科学文教事业飞速发展的需要.要使我国科学技木迅速赶上和超过世界先进水平,必须迅速发展各门科学.因而作为现代生产和科学研究的眼睛的分析化学,更必须迅速地向前发展.目前,天然资源的综合利用、尖端科学所需原料以及工农业产品等的分析检定,都离不开现代化学分析方法.因此,分析化学教学必须紧紧跟上去,否则交会影响社会主义建设的速度.分析化学是研究个别物质及其混合物的化学 相似文献
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