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1.
马铃薯病毒一步法RT-PCR诊断研究 总被引:7,自引:0,他引:7
运用一步法RT-PCR对马铃薯和烟草中的马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯卷叶病毒进行了检测,实验表明:对酚-SDS方法提取的病毒核酸进行扩增,一步法RT-PCR检测到的扩增产物的灵敏度较两步法RT-PCR的高100倍左右.两种提取方法对比,用一步法RT-PCR进行扩增,检测到的PEG法扩增产物的灵敏度较酚-SDS法扩增产物的灵敏度高3倍.建立了快速、简便、灵敏度高、特异性强的马铃薯病毒一步法RT-PCR检测技术. 相似文献
2.
使用非放射性标记digoxigenin标记的11-dUTP取代32P标记的dATP或dCTP进行核酸斑点杂交检测马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd).结果表明,digoxigenin标记具有灵敏度高,操作简单快捷,无放射性污染等优点.可检出含有PSTVd的马铃薯叶片汁液最大稀释度及含有PSTVd全序列的质粒DNA的最小量分别为1300和10pg.同时该探针也用于检测了不同马铃薯品种及TPS亲本中的PSTVd感染情况,结果显示,其中一些品种及TPS亲本已不同程度的被PSTVd感染. 相似文献
3.
用长臂光敏生物素标记含有马铃薯纺锤块茎类病毒(Potatospindletuberviroid,PSTVd)双拷贝cDNA的重组质粒pST-B14,制备成光敏生物素标记cDNA探针,用核酸斑点杂交检测感染PSTVd的马铃薯叶片和块茎提取物均出现较强的阳性杂交信号,而健康马铃薯为阴性.试验结果表明:光敏生物素标记cDNA探针检测感染PSTVd的马铃薯叶片汁液最高稀释度为1128 相似文献
4.
中国流行的马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)株系鉴定及其对产量的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
从河北、内蒙古、山西、黑龙江、福建等省区采集虎头、克疫、紫花白、同薯8号、克新1号、克新4号和克新6号、燕子以及米拉等不同栽培品种感染PSTVd的马铃薯样品中,制备PSTVd粗提取物,以加拿大PSTVd强毒株系(S-PSTVd)和弱毒株系(M-PSTVd)作对照,采用往返式聚丙烯酰胺凝胶电泳(R-PAGE)进行株系鉴定.结果表明,感染中国不同马铃薯品种PSTVd的电泳迁移率均与加拿大M-PSTVd的迁移率相同.初步表明侵染中国马铃薯的PSTVd主要是M-PSTVd.用PSTVd虎头分离物,采用针刺块茎幼芽和叶片摩擦接种方法,分别接种到无PSTVd的健康虎头和克皮上.检测结果表明,在初感染和续发感染植株中,PSTVd浓度分布有共同的规律,从顶部叶片、中部叶片到基部叶片中PSTVd浓度依次逐渐减少.PSTVd接种明显抑制了植株生长,并造成较大的产量损失.由不同品种初感植株收获的块茎,均有很高的PSTVd感染率. 相似文献
5.
利用马铃薯卷叶病毒(PLRV)复制酶基因3'端长约600bp的cDNA,用缺口平移方法进行^32P同位素标记,制备成cDNA探针,通过核酸斑点杂交,对提纯的马铃薯卷叶病毒(PLRV)、病毒RNA、PLRV感染的马铃薯汁液,表达PLRV CP基因的马铃薯叶片及块茎芽进行了检测。结果表明,^32P标记的复制酶基因cDNA探针特异性强、灵敏度高。可测得提纯病毒的最低含量为408ng/ml,病毒RNA最低 相似文献
6.
将克隆的苜蓿花叶病毒中国分离株(AIMV—Ch)RNA23′端cDNA重组到植物表达载体pROKⅡ中,用三亲融合法导入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404,采用叶圆片法转化普通烟草,诱导再生小植株.经卡那霉素抗性筛选和PCR检测,证明AIMV RNA23′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中. 相似文献
7.
利用马铃薯卷叶病毒(PLRV)复制酶基因3′端长约600bp的cDNA,用缺口平移方法进行32P同位素标记,制备成cDNA探针,通过核酸斑点杂交,对提纯的马铃薯卷叶病毒(PLRV)、病毒RNA、PLRV感染的马铃薯汁液,表达PLRVCP基因的马铃薯叶片及块茎芽进行了检测.结果表明,32P标记的复制酶基因cDNA探针特异性强、灵敏度高.可测得提纯病毒的最低含量为408ng/ml,病毒RNA最低量为27.8pg/ml,未转CP基因接种PLRV的马铃薯叶片提取液的最高稀释度为1375.接种PLRV的转CP基因的抗性马铃薯块茎芽和叶片提取液的最高稀释度为0~1/15.此探针和只转入病毒外壳蛋白基因,不接种PLRV的转基因马铃薯汁液不发生反应.表明,探针只与PLRV基因组RNA特异反应,而不与外壳蛋白基因及其mRNA反应,从而为表达CP基因的转基因马铃薯中PLRV的检测和抗病性鉴定建立了一种可靠的灵敏的分子生物学技术.此项技术已用于转CP基因马铃薯Desire,Favorita,乌盟601和虎头的抗病性鉴定 相似文献
8.
将克隆的苜蓿花叶病毒中国分离株(AlMV-Ch)RNA23′端cDNA重组到植物表达载体pROKII中,用三亲融合法导入农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404,采用叶圆片法转化普通烟草,诱导再生小植株.经卡那霉素抗性筛选和PCR检测,证明AlMVRNA23′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中. 相似文献
9.
Schwartz和Stollar(1969)报道用多聚[A]:多聚[U]和甲基化牛血清蛋白(MBSA)混合,制备成抗血清,能和多聚单核苷酸的双链结构发生特异性反应。用补体结合试验证明这种抗血清的高稀释度,便可以和双链RNA反应,包括人工合成的多聚物或自然存在于呼肠孤病毒或其他病毒中的双链核糖核酸,但和单链RNA,自然或变性的DNA均不发生反应,而且,这些核酸的存在也不抑制抗体和ds-RNA反应。因此有可能在其他核酸存在的情况下,用抗血清检出少量双链RNA。曾经用双链RNA抗血清测定单链RNA病毒在侵 相似文献
10.
近年来,为了阐明土壤的生物活性,土壤酶活性的研究已经引起了苏联,德国和其他国家学者的注意。土壤酶学已发展成为酶学中的一个独立的部分。除了土壤中活的有机体的酶促过程外,它还要研究所有参加土壤组成的成份,其中包括无机的和死的有机物质的酶促活性。在土壤的各个层次中,在这些死的物质的酶促作用下,土壤中的无机和有机物质进行着 相似文献