人脑蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1基因克隆与原核表达

从人脑组织中提取mRNA,通过RT-PCR扩增出目标cDNA,构建蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1-pEASY-E1重组质粒.将重组质粒转化进E.coli TOP10感受态细胞中,筛选阳性克隆进行验证,将测序正确的质粒转化到E.coli Transetta感受态细胞中表达SHP-1.进一步对SHP-1表达的诱导温度和IPTG浓度等条件进行优化.结果显示,所克隆的SHP-1基因片断经PCR鉴定和测序分析,与目标基因完全相符.通过蛋白表达条件的优化,发现20℃,0.4mmol/L IPTG对表达菌株进行诱导时,SHP-1可溶性蛋白表达量最大.     

蓖麻主要农艺性状及单株产量通径分析

利用 2 5个蓖麻杂交种的 14个主要农艺性状与单株产量的资料进行相关分析和通径分析 ,结果表明 ,一级分枝粒重、单株粒数、茎粗是蓖麻增产的重要因素 ,一级分枝粒重是育种目标的关键     

人源蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B功能域及其全酶的原核表达及活性比较

通过设计引物,利用RT-PCR从人肝癌细胞(huh-7)中克隆蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)全长及功能域PTPc的cDNA序列并连接到pGEM-T Vector载体上,测序正确的cDNA序列连接到表达载体pET-32a(+)上,分别在大肠杆菌Transetta(DE3)和BL21(DE3)菌株中稳定表达目标蛋白,经Ni 2+亲和柱纯化后目的蛋白达到了电泳纯,通过酶促动力学方法分析两种蛋白的体外活性.本实验成功表达了PTP1B和PTPc可溶性蛋白,并发现Transetta(DE3)菌株较BL21(DE3)有更高的蛋白表达能力;酶促动力学分析表明,PTP1B全酶的Vmax为16.13mmol·L-1·s-1,Km为0.94mmol/L;其功能域PTPc的Vmax为5.49mmol·L-1·s-1,Km为0.54mmol/L.表明PTP1B全酶的活性高于PTPc功能域的活性.     

盐胁迫短芒大麦甜菜碱醛脱氢酶基因片段的克隆与序列分析

以2％NaCl诱导3－6天的短芒大麦叶片为材料，用TRIzol试剂提取总RNA后，反转录合成cDNA，用PCR扩增得到的600bp片段，将所得序列与GenBank上已登录的序列进行同源性比较，发现它与大麦等作物的BADH基因同源性很高，并存在醛脱氢酶的保守十肽区，从而证明短芒大麦的耐盐性与小分子渗透物质的积累有关。     

蓍草组织培养的研究

以MS和8114为基本培养基，通过调整激素种类与浓度等培养条件，按正交实验设计的原则，摸索出建立蓍草组织培养体系的最佳条件：愈伤诱导最佳培养基为8114＋6BA1.0 ZT1.0；最佳分化培养基为8114 6BA4.0 NAA0.2 ZT1.0；最佳生根培养基是1/2MS0 0.1NAA。     

野大麦组织培养及植株再生的研究

以野大麦成熟胚为外植体，接种于MS 2，4-D2．0mg／L KT0．2mg／L NAA0．5mg／L Su3％的培养基中，诱导愈伤组织；然后在培养基MS 2，4-D2．0mg／L KT0．2mg／L NAA1．0mg／L Su3％上进行继代培养，每次继代时间为20天左右；再用MS KT2．0mg／L NAA0．2mg／L Su1．5％进行分化，分化率达80％以上．