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提出一种新型可重复实现单细胞的RT-PCR的实验技术,扩增目的基因.应用玻璃微电极提取单个神经细胞,裂解获得mRNA,利用RT-PCR技术检测单个神经细胞的离子通道等基因的表达.应用此技术可以灵敏地检测特定电生理现象的分子生物学基础.此法可以比较大鼠背根神经节中大细胞内HCN1的mRNA表达量.实验结果表明:扩增产物的量足够用于后续实验,而且3个重复的均一性也很好,充分表明了该研究提出的实验技术的可行性. 相似文献
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利用CRISPR/Cas9系统这一基于细菌核酸酶Cas9的新型基因编辑工具,可以在原核细胞和真核细胞中实现基因敲除的功能.首先使用CRISPR设计工具设计靶点,退火来制备sgRNA双链,用Bsm BⅠ酶切割gRNA质粒,构建Lenti CRISPRv2的重组质粒.通过U6启动子上的LKO1.5引物对每个菌落序列进行了测序验证,结果表明利用此新方法可以成功构建CRISPR/Cas9系统的Knock Out载体. 相似文献
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