具角斯氏线虫共生菌的分子鉴定

在我国的云南和贵州省进行昆虫病原线虫(Entomopathogenic nematodes)资源调查时从不同地区采集到4个品系的具角斯氏线虫Steinernema ceratophorum,以16S rDNA部分序列为分子标记对从这4个品系线虫中分离到的4株共生菌进行了初步的鉴定.测序结果显示,4株菌的16S rDNA部分序列完全一样.基于该段序列所构建的系统发育树表明,具角斯氏线虫共生菌属异杆菌属Xenorhabdus,很可能是该属的一个新种.     

Xenorhabdus nematophilus BP品系杀虫毒素基因的克隆与鉴别

构建了昆虫病原线虫共生菌Xenorhabdus nematophilus BP品系的粘粒文库并用生物测定的方法从中筛选到2个对棉铃虫初孵幼虫有口服抑杀作用的克隆cos83和cos76。为初步确定这两个克隆的毒素基因与已报道基因的差异程度，根据已发表的共生菌毒素基因序列资料设计了7对引物对这两个克隆进行PCR扩增并对扩增产物进行测序和分析。从毒力较强的cos83中，7对引物均扩增出与目标片段大小一致的产物，而从cos76中只有5对扩增到目标片段。测序结果显示，cos76的5个PCR扩增产物与cos83的对应扩增产物DAN序列同源性为100％。以cos83的7个PCR扩增产物所编码氨基酸序列进行BLAST分析，它们与X．nematophilus PMF1296和Photorhabdus luminencenc W14毒素相应区间的平均同源性分别为94％和58％，说明cos83毒素是共生菌口服毒素家族的一员但与同类的其它毒素有一定的差异，值得对其杀虫谱，作用机理等进行进一步的研究。     

Xenorhabdus nematophila BP品系xptB1基因的克隆和序列分析

采用PCR方法,从该室构建的Xenorhabdus nematophila BP品系粘粒文库的一个对棉铃虫有强口服杀虫活性的粘粒cos83中扩增出全长的xptB1基因,将扩增片段回收纯化后,连接到pMD-18T载体,转化大肠杆菌TG1后进行序列测定和分析。结果显示,该基因全长为3051bp,编码1016个氨基酸,其编码的毒素BP XptB1与X.nematophila PMF1296品系的XptB1的氨基酸序列同源性平均为95.8%,两侧高度一致,中间第607—738位差异明显。结构分析显示,两者在跨膜区,α螺旋等方面也有差异。BP XptB1与Photorhabdus luminescens的TccC毒素,Serratia entomophila的SepC,以及Yersinia pseudotubercusis和Y.pestis等的杀虫毒素均有58%以上的同源性。分析结果预示了XptB1可能是一个杀虫毒素。     

线虫共生菌对水稻纹枯病和稻瘟病的抑菌活性

用菌块移植法初步测定了38株昆虫病原线虫共生细菌对水稻纹枯病菌和稻瘟病菌的抑菌活性,从中选出9株对纹枯病菌,7株对稻瘟病菌有较强抑菌作用的菌株,再用稀释平板法分别测定了这2组菌株的发酵液对纹枯病菌和稻瘟病菌菌丝生长、菌核或分生孢子萌发的抑制活性,筛选出对纹枯病菌和稻瘟病菌都有较强抑菌活性的YNa111和YNd173等菌株.YNa111菌株的发酵液对纹枯病菌的生长有强烈的抑菌活性,稀释40倍的发酵液24 h的抑菌率为100%,160倍时为82%.菌株YNd173的发酵液对稻瘟病菌的生长有较强的抑菌活性,稀释5倍和10倍时的抑制率分别为88%和76%.     

昆虫病原线虫4新种所携带共生菌的分子鉴定

 以16S rDNA为分子标记对中山大学有害生物控制及资源利用国家重点实验室近年从我国采集到并描述发表的斯氏属昆虫病原线虫4个新种所携带的共生菌进行分类鉴定,结果显示Steinernema akhursti所携带的共生菌很可能是Xenorhabdus属的一个新种,S aciari和S. leizhouense所携带的共生菌可能是Xenorhabdus属的两个近缘的新种或同一种的两个远缘菌株,而S. beddingi所携带的共生菌可能是Xenorhabdus bovienii的一个新菌株。