大豆自花授粉后外源DNA导入技术的验证

以花生DNA为供体,大豆为受体,在大豆自花授粉后,采用液滴法和注射法导入花生DNA,在受体大豆植株后代中获得了多种变异类型。为探讨外源DNA 导入技术的可靠性,将具有卡那霉素抗性基因的质粒pCaMVneo 用同法导入大豆。所收获的种子发芽后培养于一定浓度的卡那霉素溶液中,其中部分植株对卡那霉素表现抗性,可继续生长发育。分株提取这些植株的DNA,以质粒DNA 为探针,进行斑点杂交.供试的14个植株中出现了13个阳性斑。实验结果证明质粒DNA 已整合到大豆基因组中并获表达,从而间接地证实了授粉后通过花粉管通道导入外源DNA 的技术是可靠的。     

牛酪白基因导入大豆的研究

将带有牛酷蛋白基因ｃａｓｅｉｎＢ的植物表达载体ｐＡＳ－２,在大豆自花授粉后,用注射法导入大豆受精子房中。以质粒ｐＡＳ－２的３５Ｓ－Cａｓｅｉｎ-Ｇｕｓ扯段为模板,随机引物法标记探针,对１０３株受体植株后代的ＤＮＡ进行点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,发现其中１株在点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交中均呈阳性。证明外源基因已整合到大豆基因组中。     

转牛酪蛋白基因(α_(s1)—CaseinB)cDNA花生后代的种子蛋白质及叶片Gus酶活性检测

对花生转牛酪蛋白基因cDNA子二代 ,1 4株种子胚和子叶全蛋白的SDS—PAGE电泳分析表明 ,与对照比较 7株子二代中均有一条新的蛋白质带 ,并在子叶和胚中大量表达 .对 3株子二代及对照花生幼苗叶片的Gus酶活性检测表明 :1株 ( 2 0 1 1 )Gus酶活性较强     

萝卜离体叶绿体蛋白质合成方法的比较

以萝卜为材料，研究比较了离体叶绿体蛋白质合成的两种方法．其中一种方法仅为国外报道，国内尚未见使用；另一种是国内一直使用的方法．结果显示前法合成标记蛋白质的能力优于后者．分析了造成差异的原因．     

牛酪蛋白cDNA基因克隆的改建

牛酪蛋白全长cDNA克隆pB_aS_1C184经Bgl Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切,回收其中的酪蛋白基因编码片段,与经BamH Ⅰ、SmaⅠ双酶切的植物表达载体pBI121.2分两步连接:第一步载体的BamHⅠ末端与酪蛋白基因的BglⅠ粘性末端连接;第二步用T_4DNA多聚酶补平酪蛋白基因的EcoR Ⅰ末端,再与载体SmaⅠ进行平末端连接而环化,转化JM109菌株,从得到的33个转化子中,通过~(32)P标记的酪蛋白cDNA基因为探针,点杂交筛选到一个阳性克隆。经酶切鉴定,确认酪蛋白cDNA基因编码区已正确插入到pBI121.2中。     

萝卜离体叶绿体蛋白质合成方法的比较

以萝卜为材料，研究比较了离体叶绿体蛋白质合成的两种方法，其中一种方法仅为国外报道，国内尚未见使用；中是国内一直使用方法，结果显示前法合成标记蛋白质的能力优于后者，分析了造成差异的原因。     

牛酪蛋白基因导入大豆的研究

将带有牛酪蛋白基因caseinB的植物表达载体 pAS -2 ,在大豆自花授粉后 ,用注射法导入大豆受精子房中 .以质粒 pAS -2的 3 5S -Casein -Gus片段为模板 ,随机引物法标记探针 ,对 1 0 3株受体植株后代的DNA进行点杂交和Southern杂交 ,发现其中 1株在点杂交和Southern杂交中均呈阳性 .证明外源基因已整合到大豆基因组中 .     

牛酪蛋白cDNA基因克隆的改建

牛酪蛋白全长ｃＤＮＡ克隆ｐＢａＳ１ｃ１８４Ｘ ＧＬⅢ和ＣＯｒＩ双酶切，回收基中的酪蛋白基因编码片段，与经ＢａｍＨＩ，ＳｍａＩ双酶切的植物表达载体ｐＢＩ１２．１２分两步连接；第一步载体的ＢａｍＨＩ末端与酪蛋白基因的ＢｇｌⅡ粘性末端连接；第二步用Ｔ４ＤＮＡ多聚酶补平酪蛋白基因的ＥｃｏＴＲⅠ末端，再与载体ＳｍａⅠ进行平末端连接而环化。     

根癌农杆菌介导大麦Mlo反义基因转化小麦

应用含有大麦Mlo反义基因表达载体的根癌农杆菌菌株Agl Ⅰ，对3种基因型小麦(核生3号、烟优361、扬麦158)的愈伤组织进行了转化．从其中2种基因型获得23株转基因植株，有2株是白化苗，转化频率分别为1．9％(核生3号)和2．8％(扬麦158)．PCR及Southem分析表明，外源基因已整合进植物基因组．实验结果表明，筛选压力的存在对转基因植株的获得至关重要，在无筛选压力下未获得转基因植株．7棵转基因植株移栽至大田后正常结实．     

转牛酪蛋白基因(αs1一CaseinB)cDNA花生后代的种子蛋白质及叶片Gus酶活性检测

对花生转牛酪蛋白基因cDNA子二代,14株种子胚和子叶全蛋白的SDS-PAGE电泳分析表明,与对照比较7株子二代中均有一条新的蛋白质带,并在子叶和胚中大量表达.对3株子二代及对照花生幼苗叶片的Gus酶活性检测表明1株(2011)Gus酶活性较强.