意大利蜜蜂AmCht11基因的克隆鉴定和发育时期表达分析

【目的】克隆鉴定和定量PCR分析不同发育时期意大利蜜蜂(Apis mellifera)几丁质酶AmCht11基因。【方法】克隆测序鉴定AmCht11基因序列,通过多重序列比对分析该基因编码的氨基酸序列特征和结构域组成;在线预测AmCht11蛋白的二级结构、三级结构以及相互作用靶蛋白,构建系统进化树分析该蛋白在几丁质酶家族中的分类和进化关系;实时定量PCR分析AmCht11基因的组织表达特征。【结果】AmCht11基因c DNA序列全长1 404 bp,编码468个氨基酸;预测AmCht11蛋白质相对分子质量为53.5 k Da,等电点为7.21。多重序列比对和系统进化分析表明,AmCht11蛋白为几丁质酶GH18家族Group-Ⅷ亚家族成员,该蛋白的氨基酸序列N-端含有跨膜域,具典型的几丁质酶催化结构域,无结合结构域,也不具信号肽。进一步实时定量PCR分析表明,AmCht11基因表达量在意大利蜜蜂幼虫发育第2至第5日龄无明显波动,至幼虫后期第6日龄表达量明显上调。【结论】推测AmCht11基因与意大利蜜蜂幼虫发育后期的蜕皮有关。     

球囊菌黑色素样色素的亚细胞定位及感染功能初探

【目的】鉴定黑色素样色素在球囊菌(Ascosphaera apis)孢子的定位情况，分析它在球囊菌感染意大利蜜蜂(Apis mellifera)(以下简称意蜂)幼虫中的作用。【方法】以黑色素提取法提取和纯化球囊菌孢子的黑色素样色素，制备多克隆抗血清。通过间接免疫荧光定位技术分析类黑色素在孢子中的定位特征。分别以含有孢子、黑色素样色素、孢子及黑色素样色素、磷酸缓冲液的饲料喂食意蜂3龄幼虫，统计幼虫存活率，探讨黑色素样色素在孢子感染幼虫中的作用。【结果】经分离和纯化得到了球囊菌黑色素样色素，并将它注射入小鼠(Mus musculus)体内后成功制备了多克隆抗血清。间接免疫荧光亚细胞定位结果显示黑色素样色素主要分布在球囊菌孢子壁上。感染分析结果表明：与正常摄食对照组和磷酸缓冲液对照组相比，添食球囊菌孢子使意蜂幼虫存活率有统计学意义上的下降(p<0.05)，单独添食黑色素样色素对意蜂幼虫存活率没有统计学意义上的影响；较单独添食孢子处理而言，同时添食球囊菌孢子和黑色素样色素使意蜂幼虫存活率有统计学意义上的下降(p<0.05)。【结论】球囊菌黑色素样色素定位于球囊菌孢子的细胞壁上，潜在的参与了球囊菌孢子对蜜蜂幼虫的感染。     

意大利蜜蜂AmCht11基因的克隆鉴定和发育时期表达分析

【目的】克隆鉴定和定量PCR组织表达分析意大利蜜蜂(Apis mellifera)几丁质酶AmCht11基因。【方法】克隆测序鉴定AmCht11基因序列,通过多重序列比对分析该基因编码的氨基酸序列特征和结构域组成;在线预测AmCht11蛋白的二级结构、三级结构以及相互作用靶蛋白,构建系统进化树分析该蛋白在几丁质酶家族中的分类和进化关系;实时定量PCR分析AmCht11基因的组织表达特征。【结果】AmCht11基因cDNA序列全长1404bp,编码468个氨基酸;预测AmCht11蛋白质相对分子质量为53.5kDa,等电点为7.21。多重序列比对和系统进化分析表明,AmCht11蛋白为几丁质酶GH18家族Group-Ⅷ亚家族成员,该蛋白的氨基酸序列N-端含有跨膜域,具典型的几丁质酶催化结构域,无结合结构域,也不具信号肽。进一步实时定量PCR分析表明,AmCht11基因表达量在意大利蜜蜂幼虫发育第2至第5日龄无明显波动,至幼虫后期第6日龄表达量明显上调。【结论】推测AmCht11基因与意大利蜜蜂幼虫发育后期的蜕皮有关。