VPAHPND毒力蛋白PirAB的原核表达与纯化

急性肝胰腺坏死病(Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease，AHPND)是一种新型对虾病害，其病原为一类携带编码二元毒素蛋白PirAB的弧菌(VP_AHPND)，可感染对虾且致死率高。本研究利用GenBank公布的pirAB全基因序列设计特异性引物，通过PCR获得目的基因pirA、pirB、pirAB并克隆至表达载体pET 21b(+)中，构建BL21-pET21b-pirA、BL21-pET21b-pirB、BL21-pET21b-pirAB原核表达体系；通过对诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间进行优化，分析重组蛋白的最佳表达条件；采用Ni磁珠对重组蛋白进行纯化，并以Western-blot方法分析其抗原性。结果表明，PirA、PirB、PirAB的重组蛋白分子质量分别约为17 kDa、50 kDa和(50+17) kDa，与预期大小一致。重组蛋白的最佳诱导条件：IPTG浓度0.01 mmol/L，PirA和PirAB 30℃诱导24 h、PirB 30℃诱导4 h，蛋白均呈现可溶性表达；纯化后的重组蛋白具有较好的反应原性，可为下一步的抗体制备和AHPND致病机理研究提供充足的实验材料。     

一株铜绿假单胞菌的分离鉴定及其对VPAHPND拮抗效果的评价

近年来，急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND)造成了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖业巨大的经济损失，其病原为一类含有致病基因PirAB的弧菌(Vibrio),主要为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP_AHPND).本研究以VP_AHPND为受试菌株，从江苏海域捕获的黄姑鱼(Nibea albiflora)体内分离筛选对VP_AHPND具有抑制作用的拮抗菌株.通过形态学、生理生化及分子生物学方法进行鉴定，研究了其拮抗效果、拮抗活性物质，并对生物安全性和被动保护效果进行评估.结果表明，分离筛选出1株具有良好拮抗效果的菌株JSHY97,经鉴定该菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa).该菌株对3株具有不同分型的VP_AHPND均具有良好的拮抗效果，其抑菌圈直径达19.25 mm～21.80 mm,初步判断其活性物质来源于胞外产物.口服JSHY97的凡纳滨对虾...