重组牛生长激素油混悬长效注射剂的体内外缓释行为和效果研究

通过对重组牛生长激素油混悬制剂体外缓释效果的研究发现,油混悬制剂首日释放量为20.3%,且能持续释放至31 d.为验证其在体内的缓释效果,18只去垂体雄鼠分成5组,分别为4个不同剂量的牛生长激素油混悬制剂组和1个PBS对照组.试验的第1天试验Ⅰ组,试验Ⅱ组,试验Ⅲ组和试验Ⅳ组的每只大鼠分别皮下注射药物含量为4.2%的重组牛生长激素油混悬长效注射剂0.84,1.4,2.8 mg和4.2 mg,对照组皮下注射PBS溶液120μL/只.注射后大鼠每天上午称重1次,连续称重32 d并观察大鼠的增重.注射PBS的去垂体大鼠体重相对比较稳定,32 d累积增重5.87 g,增重6.9%.药物处理32 d后试验Ⅰ组增重为18.66%,试验Ⅱ组增重为18.97%,试验Ⅲ组增重为20.61%,试验Ⅳ组增重为27.38%.试验Ⅰ组和试验Ⅱ组与对照组累积增重的差异均显著(P<0.05),试验Ⅲ组和试验Ⅳ组与对照组累积增重的差异均极显著(P<0.01).另外,试验Ⅳ组和试验Ⅰ组累积增重差异性显著(P<0.05),注射31 d后试验组大鼠的体重仍有增加的趋势.上述结果表明此种油混悬注射剂在体内至少能缓释31 d,其有望发展成为新型长效制剂.     

猪IFNα在毕赤酵母中分泌表达条件的优化及高密度发酵

从发酵时间、接种量、pH值、诱导剂量等方面对重组基因工程（毕赤酵母甲醇利用缓慢型）的摇瓶发酵条件进行了优化，进一步探索了酵母菌表达猪IFNα的发酵工艺，包括种细胞密度对初始发酵期的影响，补加甘油、甲醇速率条件的控制等．结果表明，摇瓶发酵时，诱导最佳时间为96h，甲醇最适浓度为8g/L，发酵pH范围为6.4～9．0．最适接种量2：1．在分批发酵、接种量为10%且种子细胞光密度（OD600）为5～6时，最有利于细胞的高密度培养，在补料发酵时，根据溶氧控制甘油流加速率与时机，细胞干重达到118．75g／L，在48h重组猪IFNα表达量达到1。304g／L．     

重组猪α-干扰素的纯化及生化性质鉴定

对巴斯德毕赤酵母高效分泌表达的猪α-干扰素(PoIFN-α)纯化工艺和纯化后重组蛋白的部分生化特性进行了研究,结果表明:猪α-干扰素(PoIFN-α)发酵液经离心、透析、过滤处理之后,依次利用亲和层析和离子交换层析使目的蛋白得到了纯化.经N端氨基酸测序,Westem-blot,对酸、热、巯基乙醇的稳定性和糖基化程度等检测后发现,所表达的猪α-干扰素N端氨基酸序列(前5个)正确,对酸和热基本稳定,二硫键对目的蛋白的活性至关重要,没有发现目的蛋白的糖基化.