VPAHPND毒力蛋白PirAB的原核表达与纯化

急性肝胰腺坏死病(Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease，AHPND)是一种新型对虾病害，其病原为一类携带编码二元毒素蛋白PirAB的弧菌(VP_AHPND)，可感染对虾且致死率高。本研究利用GenBank公布的pirAB全基因序列设计特异性引物，通过PCR获得目的基因pirA、pirB、pirAB并克隆至表达载体pET 21b(+)中，构建BL21-pET21b-pirA、BL21-pET21b-pirB、BL21-pET21b-pirAB原核表达体系；通过对诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间进行优化，分析重组蛋白的最佳表达条件；采用Ni磁珠对重组蛋白进行纯化，并以Western-blot方法分析其抗原性。结果表明，PirA、PirB、PirAB的重组蛋白分子质量分别约为17 kDa、50 kDa和(50+17) kDa，与预期大小一致。重组蛋白的最佳诱导条件：IPTG浓度0.01 mmol/L，PirA和PirAB 30℃诱导24 h、PirB 30℃诱导4 h，蛋白均呈现可溶性表达；纯化后的重组蛋白具有较好的反应原性，可为下一步的抗体制备和AHPND致病机理研究提供充足的实验材料。