分解菊粉微生物的筛选和初步鉴定

应用富集培养定向筛选技术，从菊芋根际土壤中分离到１８０余株分解菊粉的各类微生物．通过透明圈法初筛及摇瓶复筛，获得产菊粉酶能力最高的霉菌菌株ＡＪ１４０５，最高酶活可达１３·２μｍｏｌ·ｍｉｎ－１，初步鉴定为黑曲霉     

一步酸法水解菊粉生产高果糖浆

用黑曲霉突变株AJ1958产生的菊粉酶，水解菊粉抽提液生产高果糖浆．以6O目菊芋粉在水料比为6：1，料液pH3．0~3．5，60℃条件下浸泡0·5h，过滤，其菊粉抽提率可达95％以上．在每克菊粉投酶量120μmol／min下，水解菊粉抽提液6h～7h，水解率达到95％以上．调nH至4．2～4．5，经活性炭脱色，减压浓缩，得可溶性固形物浓度为0·77g／g以上，果糖含量0．90g／g以上，具有果糖纯正香味的高果糖浆．     

黑曲霉AJ1958菊粉酶的产生和性质

从菊芋根际土壤中分离出一株菊粉酶（ＩｎｕｌｉｎａｓｅＥ．Ｃ．３．２．１．７）产生菌，经物理和化学诱变得高酶活黑曲霉突变株ＡＪ１９５８．该菌株在培养基（０．０７ｇ／ｍＬ菊芋提取液１０００ｍＬ，豆饼粉５ｇ，麸皮５ｇ，ＫＣＩ０．７ｇ，ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０１ｇ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．５ｇ，ＰＨ５．０）中，于３０℃振荡培养３ｄ，酶活力可达６４μｍｏｌ·ｍｉｎ－１．酶水解反应的最适ＰＨ为３．０～４．０，最适温度为６０℃，在ＰＨ２．５～５．５的范围内和７５℃以下较稳定．适宜条件下，１０ｈ内０．０５ｇ／ｍＬ的菊粉溶液中之底物几乎１００％被酶水解．产物糖中果糖质量分数为９３％，葡萄糖质量分数为５．６％．该突变株产生的菊粉酶具有较满意的水解性和热稳定性．     

菊粉酶产生菌的选育及发酵条件

野生型黑曲霉ＡＪ１４０５经紫外线、硫酸二乙酯和亚硝基胍等多代诱变处理，获得一株产菊粉酶（ＩｎｕｌｉｎａｓｅＥ．Ｃ．３．２．１．７）能力较高的变异菌株ＡＪ１９５８．连续传代１０次，ＡＪ１９５８突变株无衰退，是稳定的变异菌株．其产生的菊粉酶只被菊粉（Ｉｎｕｌｉｎ），而不被蔗糖、淀粉、纤维素、葡萄糖或果糖诱导．在１０００ｍＬ０．０７ｇ／ｍＬ菊芋提取液中添加豆饼粉５ｇ，麸皮５ｇ，２５０ｍＬ三角瓶中装５０ｍＬ培养液，于３０℃，１２０ｒ／ｍｉｎ旋转式摇床振荡培养３ｄ，酶活力可达６４μｍｏｌ·ｍｉｎ（－１）．Ｋ＋，Ｆｅ（２＋），Ｍｇ（２＋）对酶形成有促进作用．     

苜蓿根瘤菌突变株JH66积累聚β-羟基丁酸

苜蓿根瘤菌突变株JH66菌体生长最适培养基为：蔗糖5g，牛肉膏1g，蛋白胨1g，K2HPO40.0．5g，CaSO40．2g，Na2MoO40.01g，H2O1L，pH7.0．培养1d后，补加葡萄糖至聚β-羟基丁酸（PHB）积累最适碳氮比为15：1，继续培养1d，干菌体PHB含量有显著提高．