小鼠胚胎快速冷冻方法的研究

3770枚小鼠胚胎随机分为以下12个试验组:三个不同浓度甘油(2.1、2.8和3.5M)分别与四个浓度蔗糖(0.25、O.5、0.75和1.00)配合成12种不同高渗快速冷冻液。通过对比筛选试验,对昆明小鼠的紧缩致密期早囊胚快速冻存试验.确定3.5M甘油和0.25M蔗糖混合成的快速冷冻液为最佳组合,用其处理的胚胎,经快速冷冻、解冻后。胚胎体外培养发育率最高,达84.3％,其中膨胀期和孵化期胚胎为78.3％,明显高于其它11种组合(P<0.01)。     

小鼠胚胎冷冻方法的研究

本试验共用小鼠胚胎7858枚,对冷冻-解冻小鼠胚胎过程中的一些环节进行了对比试验,结果表明,冷冻过程中诱发结晶温度最好为-7℃左右,致冷时间以15—20秒为宜。致冷时间过长或过短都会引起解冻后胚胎成活率的下降。将胚胎缓慢冷冻至—0——40℃再投入液氮可获得较理想成功率。而—25℃以前投入液氮的胚胎其解冻后体外发育能力明显不如—30℃以后投入者。将胚胎冷冻管投入液氮的方式,对解冻后胚胎的形态和体外发育能力均有显著影响。将胚胎冷冻管插入液氮深部的效果显著优于漂浮于液氮表面者。添加甘油的方法对解冻后胚胎的体外发育能力无显著影响,三步添加甘油和一步添加甘油的胚胎,在解冻后培养的发育率和膨胀率方面均无显著差异。脱除甘油的方法明显影响解冻后胚胎的体外发育能力,在1/3M蔗糖液中分步脱除甘油的方法。明显优于在0.5M蔗糖液中一步脱除法。缓慢冷却至—36℃投入液氮的胚胎,在30～35℃水浴中解冻后体外培养成活率最高,而在0℃,10℃和20℃解冻的胚胎成活率明显降低。