白杨素对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的:研究白杨素(CR)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测小鼠活化T细胞CD69的表达情况;用羧基荧光素已酰已酸(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,分析T细胞增殖相关指数;用碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布。结果:加入终浓度为5、25、50μmol/L的CR后,活化T细胞CD69的表达率由ConA对照组的(85.12±1.07)%,分别降低为(78.42±1.82)%、(66.24±1.43)%和(53.09±1.77)%;72 h的T细胞增殖指数由ConA对照组的2.29±0.14分别降至1.91±0.02、1.47±0.03和1.14±0.01;对细胞周期的影响表现为:随着CR浓度升高,处于G0/G1期的细胞增加,S期细胞减少,25μmol/L时,G2/M期细胞也减少。结论:CR能有效抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖,阻滞活化细胞从G1期进入S期,是一种潜在的免疫抑制剂。     

体外快速筛选抗HIV药物的一种新方法

目的:介绍一种体外快速筛选抗H IV药物的新方法。方法:采用荧光染料钙荧光素(Cal-ce in-AM)标记H IV感染的慢性H9细胞(H9/H IV-1ⅢB)与不同稀释浓度的药物作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,2 h后用荧光显微镜观察MT-2和H9/H IV-1ⅢB融合细胞的变化;孵育3 d后用MTT法检测药物对H IV感染细胞的保护作用和H IV-1p24抗原试剂盒检测药物作用后的细胞培养上清p24抗原含量的变化。结果:药物(双黄连粉针剂)能够抑制MT-2和H9/H IV-1ⅢB细胞融合(双黄连粉针剂抑制融合的EC50为3.18 mg/L,选择指数SI大于314.5);能够保护H IV感染细胞的死亡(EC50为10.59 mg/L,SI大于94.43)和减少H IV-1p24抗原的表达(EC50为23.29 mg/L,SI大于42.9)。结论:运用此方法4~6 h即可初步判断药物是否具有抗H IV的作用,此方法可简便直观,敏感快速进行抗H IV药物的筛选。     

自发性流产CBA/J×DBA/2小鼠母-胎界面DX5+CD69+细胞的浸润

目的研究DX5+CD69+细胞浸润与CBA/J×DBA/2小鼠自发性胚胎吸收的关系.方法CBA/J×DBA/2小鼠(A组)和CBA/J×BALB/c小鼠(B组)分别用作自发性流产模型和生育力正常对照.DX5用作广泛性NK细胞标志物,CD69作为NK细胞和T细胞活化标志物.采用流式细胞术检测母-胎界面淋巴细胞中CD69+细胞百分率,DX5+CD69+细胞与DX5+细胞比率,并对细胞数量与胚胎吸收率进行线性相关回归分析.结果A组孕13.5 d胚胎吸收率为34.1% (45/132),显著高于B组 (6.6%, 9/137; P<0.001).同时A组DX5+CD69+细胞与DX5+细胞比率 (28.1±11.9)%显著高于B组(19.5±5.7)%, (P<0.01).此外,A组DX5+CD69+与DX5+细胞比率(x)和胚胎吸收率(y)之间存在强线性相关(r=0.807, P<0.001, y=-1.157+1.278x).结论母-胎界面过多的DX5+CD69+细胞浸润可能与CBA/J×DBA/2小鼠胚胎吸收有关.     

清开灵注射液体外抑制HIV-1作用

目的:研究清开灵注射液(QKL)体外抑制HIV-1的作用.方法:用MTT比色法检测QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞(慢性感染HIV-1ⅢB的H9细胞)和MT-2细胞的毒性;采用荧光染料Calcein-AM标记的H9/HIV-1ⅢB细胞和系列稀释的QKL作用后.与MT-2细胞混合培养,2 h后在荧光下计数融合细胞数目,评价QKL对两种细胞早期融合的影响;用MTT法检测QKL对HIV-1ⅢB急性感染的MT-2细胞的保护作用;用HIVp24抗原试剂盒检测HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞的培养上清p24抗原的含量,分析QKL对HIV-1复制的影响.结果:QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞的CC50分别为1/50.76和1/36.97;抑制H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞早期融合作用的EC50=1/235.29,SI=6.36;对HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞保护作用的EC50=1/144.93,SI=3.92;抑制p24抗原产生作用的EC50=1/175.44,SI=4.75.结论:QKL体外有抗HIV-1活性,作用机制可能是多靶点的,可抑制病毒进入细胞和胞内复制.     

hNIS转基因介导131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:克隆人的甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因,研究其转导在鼻咽癌细胞内的功能,以及131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到pcDNA3.1(+)-FLAG载体,获得重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG.采用脂质体转染的方法,将pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG质粒导入到鼻咽癌细胞株CNE2,G418筛选得到稳定表达hNIS鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS,体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取和外流情况.CCK8试剂盒检测131碘对鼻咽癌细胞增殖的作用,AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞技术(FCM)检测131碘作用后鼻咽癌细胞凋亡情况.结果:成功克隆hNIS基因,并建立能稳定表达hNIS的鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS.CNE2-hNIS对125碘的吸收量比CNE2高约15倍,但在无碘的环境中,细胞内滞留的碘外流迅速,有效半衰期约8 min.131碘在72 h后对CNE2-hNIS的增殖产生抑制作用,细胞早期凋亡率增加,并随着131碘浓度的增加,作用逐渐增强(P<0.01).结论:从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染鼻咽癌细胞后,能使鼻咽癌细胞发挥高水平吸碘功能,131碘能够抑制转染hNIS的鼻咽癌细胞的增殖,促进细胞凋亡.     

鹰嘴豆芽素A对小鼠T淋巴细胞体外活化增殖和细胞周期的影响

目的:研究黄酮类化合物鹰嘴豆芽素A(biochanin A,bioA)对小鼠T淋巴细胞的活化增殖和周期的影响.方法:运用双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术分析bioA对小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂(ConA)刺激下早期活化抗原CD69表达的影响;运用羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFDA-SE)标记技术结合流式细胞术,分析T淋巴细胞增殖相关指数;用碘化丙锭(propidium iodide,PI)染色分析T淋巴细胞细胞周期变化.结果:终浓度为25、50μmol/L的bioA对ConA刺激下的T淋巴细胞早期活化抗原CD69表达具有明显的抑制作用(P＜0.05),50 μmol/L抑制达到峰值;CFDA-SE染色法显示,25、50 μmol/L bioA对ConA诱导的T淋巴细胞增殖作用具有显著的抑制作用(P＜0.05);终浓度为5、25、50 μmol/L的bioA能够使ConA刺激的T淋巴细胞滞留于G0/G1期,减少处于S期和G2/M期细胞数.结论:BioA对小鼠T淋巴细胞的活化增殖和周期具有明显的抑制作用.