甘蔗UGPase cDNA的克隆及序列分析

以甘蔗(FN95-1702)为材料,通过RT-PCR,首次克隆得到了甘蔗UGPase cDNA片段.该片段长1 495 bp,其中包含完整的ORF为1 431 bp,共编码476个氨基酸,并含有5个重要的Lys残基位点,分别为Lys257、Lys321、 Lys367、 Lys408、 Lys409,它们对维持UGPase活性及与底物结合方面发挥着重要作用.     

甘蔗果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶基因的cDNA克隆及序列分析

以高等植物玉米、水稻的果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶(F2KP)的保守区域设计引物,并采用逆转录--聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从甘蔗叶片中扩增F2KP的cDNA片段,命名为SoF2KP-L.该cDNA片段长2 178 bp,含2 085 bp的完整开放阅读框,编码 694个氨基酸.序列分析表明,甘蔗F2KP与其它已知的高等植物F2KP具有很高的同源性.     

ScINO1基因克隆及酵母多基因多拷贝整合表达载体的构建

利用PCR技术,以酿酒酵母S288c的基因组DNA为模板,扩增酿酒酵母肌醇-1-磷酸合成酶基因(ScINO1)包含1 602bp的开放读码框,克隆后经PCR和酶切反应进行了鉴定,测序结果与GenBank上已登录的ScINO1序列完全一致.对PUG6载体进行改造,构建了rDNA介导的多拷贝整合表达载体pURH,并将ScINO1基因连入载体pURH,获得ScINO1基因超表达载体pURIH.为下一步的微生物发酵法产肌醇和获得能够耐高乙醇的酵母工程菌株的研究奠定基础.     

甘蔗SPS Ⅲ启动子区ATCT-motif和CAT-box元件的酵母单杂交报告载体构建

蔗糖磷酸合成酶是植物蔗糖代谢中关键限速酶之一,为了更具体分析光响应元件ATCT-motif与分生组织特异性元件CAT-box的功能,将含有ATCT-motif和CAT-box的SPSⅢ5’侧翼序列(-1 320～-1 210),顺式作用元件SPSⅢ-AB,构建应用酵母单杂交体系的诱饵报告载体pAbAi-SPSⅢ-AB,并转化进酵母,为进一步探讨SPSⅢ基因的调控序列奠定基础.     

马尾松银松素合酶基因转化双子叶植物表达载体的构建及鉴定

以马尾松为材料,在获得马尾松银松素合酶基因的基础上,构建了该基因转化双子叶植物的表达载体,该表达载体含有35S启动子和NOS终止子,能启动基因在双子叶植物中高效地表达.设计并合成分别含有Bgl和BstE酶切位点的上下游引物,通过PCR反应扩增出含有该酶切位点的银松素合酶基因cDNA全序列,酶切后连接到pCAMBIA1301植物表达载体上.经PCR鉴定、酶切分析及DNA测序证实cDNA片段大小、序列以及读码框的正确性.最后通过电击将表达载体转化农杆菌LBA4404,为进一步研究银松素合酶基因的功能奠定基础.     

水分胁迫下Ca2+与甘蔗内源ABA的关系

本文选取甘蔗（Saccharum officinarum L．）福农95—1702为材料，结合钙离子螯合剂EGTA预处理，对水分胁迫下Ca^2＋与内源激素ABA的关系进行研究。结果表明，30％PEG处理下，甘蔗幼苗叶片中的内源ABA含量升高。1—3mmol／L的EGTA预处理显著抑制了水分胁迫下内源ABA的累积。这些结果表明Ca^2＋可能参与了水分胁迫下ABA的合成和释放，第二信使Ca^2＋与ABA所介导的信号转导之间可能存在交流与互作，协同调节甘蔗的抗旱性。