葡萄试管苗移栽研究（简报）

葡萄试管苗移栽研究（简报）崔百明，李予霞，宋于洋（中心实验室）（园艺园林工程系）ＳｔｕｄｙｏｎＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｏｆＧｒａｐｅＴｅｓｔ—ｔｕｂｅＳｅｅｄｌｉｎｇｓ￥ＣｕｉＢａｉｍｉｎｇ；ＬｉＹｕｘｉａ；ＳｏｎｇＹｕｙａｎｇ（Ｌａｂｏｒａｔ...     

小拟南芥ApCBF基因的克隆及转化烟草的初步研究

CBF是植物冷驯化过程中的关键性调节因子。利用PCR及染色体步移法从新疆特有拟南芥近源种植物——小拟南芥的基因组中克隆了CBF基因的同源序列（DQ207404）。生物信息分析表明，该序列具有完整的读码框，推定的蛋白质序列与拟南芥CBF1，2，3的相似性分别为：87．6％、86．6％和88．1％。以植物表达载体pBI121为基础，构建了由组成型启动子35S调控ApCBF的植物表达载体pCB111。通过根癌农杆菌介导，采用叶盘法转化烟草，PCR检测初步证明却ApCBF基因已整合到烟草基因组中。为利用ApCBF基因改良植物抗逆性奠定了物质基础。     

转基因棉PCR与卡那霉素检测的比较

对尚未提纯的转基因棉１７９自交后代进行卡那霉素检测和ＰＣ检测,结果表明卡那霉素检测与ＰＣＲ检测结果一致;抗卡那霉素植株ＰＣＲ检测均呈阳性,而对卡那霉素敏感植株均未扩增出特异性带。     

PEG处理下葡萄试管苗脯氨酸及内源ABA含量变化的研究

用不同浓度的PEG处理全球红葡萄生根试管苗，造成一定程度的水分亏缺，观察葡萄试管苗在水分胁迫下的生理反应。结果表明：PEG处理导致葡萄试管苗脯氨酸的积累和内源ABA的迅速增加。6％PEG胁迫处理66h时脯氨酸含量达到高峰，72h又有所下降；而3％PEG胁迫处理脯氨酸含量仍保持持续上升趋势。内源ABA在12h内达到第一个峰值，含量为对照的两倍多，并维持比对照略高的水平；而6％PEG胁迫处理植株在48h时ABA再次积累，含量比对照高100多倍。     

利用目的基因转化技术培育棉花抗病新品种

用花粉管通道法将菜豆几丁质酶基因与烟草β－1、3葡聚糖酶基因双价植物表达载体pBLGC导入新疆棉花主栽品种（系）系550、822、1304、石远321。通过卡那霉素检测、PCR－Southern验证、抗黄萎病、枯萎病性筛选，得到抗病性良好且遗传性稳定的转基因棉花。经过6年10个世代的选育，育成抗枯萎病、抗（耐）黄萎病的转基因抗病新品系。     

利用随机引物对PCR反应条件的筛选及优化试验

不同试验PCR反应的条件是不完全一致的，在PCR反应进行前就有必要对反应条件进行筛选和优化，因此，提出了对关键实验条件的正交筛选，结合反应的增强与抑制条件，从而筛选出适用于本实验室的最佳反应条件。     

棉花转基因植株的试管内筛选

利用不同浓度卡那霉素对转基因棉花在试管内进行筛选,通过对棉苗子叶颜色的变化情况的观察以及对棉苗平均苗重,根重,茎重,茎长的显著性分析表明：用卡那霉素１５００ｍｇ／ｍＬ处理１５天后,转基因棉花地颜色正常,而对照棉花子叶全部褪绿变白,以此作为选择标记,能够得到比较理想的筛选效果。     

棉花DELLA蛋白GhGAI2b基因的克隆和功能初步分析

DELLA蛋白是赤霉素信号途径的负调节因子,在棉花纤维发育中有着重要作用。本研究采用同源克隆方法,从棉花中克隆DELLA蛋白Gh GAI2b基因,构建p BP35S:Gh GAI2b和p BP35S:Ghgai2b植物过表达载体,通过农杆菌介导的滴花法转化Col野生型拟南芥。结果表明,棉花DELLA蛋白Gh GAI2b包含了DELLA蛋白家族中所有的典型保守区域;转基因拟南芥表现出莲座叶半径变短,植株矮化,花序紧凑,花器官发育迟缓等生长发育受抑制表型。说明棉花DELLA蛋白Gh GAI2b基因可能参与GA信号途径抑制植物生长发育。     

新疆加工番茄上一种类似南方番茄病毒的分子检测

在对加工番茄里格87-5进行RNA测序时,我们发现存在南方番茄病毒的基因组序列,序列包含STV除5′末端12bp和3′末端35bp的其它全部3390bp的RNA序列,其中只有5个碱基存在差异(与EF442780相比),说明里格87-5感染了STV。为了快速检测加工番茄品种的病毒感染情况,我们设计了STV特异性的PCR引物STV168F/STV745R,用一步法RT-PCR方法,从里格87-5的总RNA中扩增得到了预期的577bp的扩增产物,回收、克隆到pGEM-T上,提取质粒经EcoRI酶切鉴定后进行序列测定,与已报道的STV的序列同源性为99%～100%,表明该片段是STV特异性的。运用这项技术调查了20份加工番茄材料,结果显示,有3份材料的全部植株均带毒,13份材料均不带毒,另外4份材料部分带毒。同时,在新疆石河子蔬菜花卉研究所随机采集了加工番茄叶片样品,统计大田检出率约为28%。     

棉花GhGAI1基因克隆及其功能的初步分析

DELLA蛋白是赤霉素信号通路中重要的蛋白质作用因子,负调节植物体中赤霉素的水平,同时受到生长素、脱落酸和乙烯的共同调节。根据已知的生物信息数据,本研究克隆了棉花GhGAl1基因,序列分析表明它编码DELLA蛋白。构建GFP与GhGAl1融合蛋白重组质粒,利用根癌农杆菌介导的花浸泡转基因方法转化拟南芥columbia生态型植株,进行过量表达实验。结果表明,GFP—GhGAl1融合蛋白定位于细胞核并且在施加赤霉素后迅速降解,表明该基因编码蛋白参与赤霉素信号通路。