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钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2在哺乳动物组织中广泛表达,具有转运中性氨基酸的功能,在谷氨酸-谷氨酰胺循环、肝脏糖质新生等生物通路中发挥重要作用．为了方便测定SNAT2在细胞膜上的表达和定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接将HA标签蛋白与SNAT2的C末端连接,构建了真核生物表达载体pBK-CMVA（1098—1300）-SNAT2-HA表达载体．用脂质体转染法将该表达载体瞬时转染到HEK293T细胞中,通过Westernblot法检测到SNAT2-HA融合蛋白在细胞膜上的正确表达和定位．pBK-CMV△（1098-1300）-SNAT2-HA表达载体的成功构建,为今后对SNAT2的结构和功能的研究提供了有效方法． 相似文献
2.
Na+偶联的中性氨基酸转运蛋白SNAT1是一种膜蛋白,属于转运蛋白第38家族(SLC38),在中枢神经系统(CNS)中起到重要的生理学作用.为了更容易地检测SNAT1在细胞膜上的表达,以pBK-CMVΔ-SNAT1为模板,用PCR,双酶切和T4连接酶连接的方法在SNAT1的C端加上了一个HA标签蛋白,构建了一个新质粒pBK-CMVΔ-SNAT1-HA.用该质粒瞬时转染人胚胎肾细胞(HEK293T),转染36 h以后,融合蛋白SNAT1-HA可以用HA抗体检测.Western blot结果显示在约54 kDa处有一条特异性条带,与预期分子量大小一致.利用重组质粒pBK-CMVΔ-SNAT1-HA可以更方便地检测到SNAT1在细胞膜上的表达与定位,为进一步研究SNAT1结构与功能奠定了基础. 相似文献
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Na+偶联的中性氨基酸转运蛋白SNAT1是一种膜蛋白,属于转运
蛋白第38家族(SLC38),在中枢神经系统(CNS)中起到重要的生理学作
用.为了更容易地检测SNAT1在细胞膜上的表达,以pBK-CMVΔ-SNAT1
为模板,用PCR,双酶切和T4连接酶连接的方法在SNAT1的C端加上了一
个HA标签蛋白,构建了一个新质粒pBK-CMVΔ-SNAT1-HA.用该质粒瞬
时转染人胚胎肾细胞(HEK293T),转染36 h以后,融合蛋白SNAT1-HA可
以用HA抗体检测.Western blo 相似文献
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