凝胶阻滞试验分析铜绿假单胞菌LexA蛋白与其靶位点的特异性结合

目的：分析铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa，PA）的LexA与其靶位点的特异性结合的特性。方法：以PCR法扩增PA的LexA基因，将其克隆于原核表达载体pET-22b（＋），转化大肠埃希菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，采用镍离子亲合柱层析和Superdex-75凝胶过滤层析分离和纯化目的蛋白，以含推定LexA结合位点的片段CTGTN27ACAG为探针，用凝胶阻滞试验检测LexA蛋白与探针序列结合的能力及特异性。结果：构建了pET22bLexA重组质粒，IPTG诱导目的蛋白表达率约为25％，获得纯度大于95％的目的蛋白；CTGTN27ACAG能与LexA蛋白发生特异性结合。结论：推定LexA结合位点CTGTN27ACAG能与PA的LexA蛋白特异性结合，可能是LexA蛋白的结合靶位点。     

春节前后非体育专业大学生体质变化的研究

应用 ,实验法、问卷调查法、文献资料法和数理统计法 ;对非体育专业学生春节前后体质变化进行分析研究 ,为体育教学改革与全民健身计划提供数据和理论依据 ;分析结果表明 :非体育专业男生最大吸氧量、握力显著降低 ,而其他指标没有太大的差异 ;非体育专业女大学各项指标均无显著差异 ;其结论为非体育专业男大学生最大吸氧量的降低主要与运动有关 ,女生各项指标无显著性差异主要因平时运动较少 ,春节期间生活规律基本保持正常 ;为减少春节对体质的负面影响 ,非体育专业学生则应主要注意自觉地参加体育锻炼。     

论多媒体技术在高职院校机电一体化专业英语教学的应用

随着现代化教学手段的出现,多媒体技术越来越多的出现在教学中,该文对多媒体技术在专业英语教学中的利弊进行剖析,探索多媒体技术与教学的衔接,提出了一些注意问题和改进设想.     

凝胶阻滞试验分析铜绿假单胞茵LexA蛋白与其靶位点的特异性结合

目的:分析铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginoso,,PA)的LesA与其靶位点的特异性结合的特性.方法:以PCR法扩增PA的LexA基因,将其克隆于原核表达载体pET-22b( ),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用镍离子亲合柱层析和Superdex-75凝胶过滤层析分离和纯化目的蛋白,以含推定LexA结合位点的片段CTGTN27ACAG为探针,用凝胶阻滞试验检测LexA蛋白与探针序列结合的能力及特异性.结果:构建了pET22b-LexA重组质粒,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25%,获得纯度大于95%的目的蛋白;CTGTN27ACAG能与LexA蛋白发生特异性结合.结论:推定Lex4结合位点CTGTN27ACAG能与PA的LexA蛋白特异性结合,可能是LexA蛋白的结合靶位点.     

道德与天地：论新理学“境界”之如何可能-兼答邓联合博士的一个问题

冯友兰新理学的"境界"是以"觉解"为枢纽的.在新理学的境界思想中, "觉解"有"形上"和"形下"的两个向度.<新理学>严格区分了"形上"与"形下";而在<新原人>的道德境界与天地境界里,本来所严格区分的"形上"与"形下"又得到了有机的结合;从而使新理学之道德境界与天地境界的实现成为可能.     

诌议对当前水电厂计算机监控系统改造的问题

电子产品在使用过程中均收年限限制,因此各水电厂的监控系统在使用到相应时间后均需要进行合理改造才能保证其具有良好的使用效果.在对水电厂的计算机监控系统进行改造过程中,应对监控系统的发展趋势、水电厂实际运行等问题进行综合性考虑,只有这样才能取得理想的改造效果.     

定量组织化学技术在死亡时间推断中的应用

组织化学技术应用物理和化学方法 对组织与细胞的化学成分及其变化规律进行定性、定位、定量研究.自应用以来已在诸多领域取得了较大发展.该文对图像分析技术、流式细胞技术在法医学研究死亡时间推断中的应用进展进行综述,旨在为法医学实践及进一步研究提供参考.     

铜绿假单胞菌的LexA蛋白在大肠杆菌中的高效表达与纯化

目的:对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的阻遏蛋白LexA进行基因克隆、重组表达及蛋白纯化.方法:采用PCR法从PAO1株基因组中扩增出1 086 bp的LexA基因,将此基因片段插入到表达载体pET32a( )上,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.包涵体洗涤后用8 mol/L尿素溶解,以镍离子亲合柱层析作为第1步纯化,Superdex75凝胶过滤层析作为第2步精细纯化,反相高相液相色谱法(HPLC)测定蛋白的浓度.结果:LexA以包涵体形式表达,表达量为45%,经镍离子亲合柱层析纯化后LexA蛋白纯度达到85%以上,回收率大于80%,镍离子亲合柱层析和凝胶过滤层析两步纯化目的蛋白,经HPLC测定,最终目的蛋白的纯度为98.97%.结论:在pET32a( )表达系统中实现了PA的LexA蛋白的高效表达,两步纯化法获得高纯度的目的蛋白,为进一步鉴定LexA靶位点奠定了基础.     

5-甲基-4-异噁唑甲酰肼的合成研究

以乙酰乙酸乙酯为起始原料,经缩合、环合、水解得到5-甲基-4-异噁唑甲酸,再与氯化亚砜、水合肼反应得5-甲基-4-异噁唑甲酰肼（三氮唑类衍生物重要中间体）,并研究了温度、原料配比和加料顺序等对合成的影响。化合物6结构经IR、1H-NMR、13C-NMR、MS等确证正确。该方法原料易得、操作简便,后两步收率为65%,产品纯度达到98%。     

核电厂严重事故下预应力混凝土安全壳极限承载力分析

安全壳作为反应堆和环境之间的实体屏障,需要在各种事故工况下能够防止或缓解放射性物质向环境的释放,其中严重事故下的极限承载能力是衡量安全壳完整性的重要指标。通过构建预应力混凝土安全壳结构模型,分别考虑材料本构模型、预应力损失和严重事故下的温度压力效应,对不同内压载荷下安全壳的结构特性进行非线性有限元分析计算,并结合失效准则,研究安全壳极限承载力的确定方法。结果表明：安全壳极限承载力由设备闸门附近区域的应力水平控制,当内压增大到0.96MPa时,安全壳筒壁混凝土全截面达到抗拉强度,大部分混凝土退出工作,当内压增大到1.21MPa时,设备闸门附近的钢衬里出现一定的屈服,安全壳达到承载力极限状态。